Amplite 荧光法黄嘌呤检测试剂盒

Amplite 荧光法黄嘌呤检测试剂盒

        Amplite 荧光法黄嘌呤检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测黄嘌呤的试剂盒，黄嘌呤是在大多数人体组织和液体中发现的嘌呤碱。 许多兴奋剂来源于黄嘌呤，包括氨茶碱，IBMX，旁黄嘌呤，己酮可可碱，可可碱和茶碱，它们可以刺激心率，收缩力，高浓度的心律失常。 因此，检测生物样品中的黄嘌呤变化对于**诊断和**监测是重要的。 Amplite 荧光黄嘌呤测定试剂盒为黄嘌呤的测量提供了快速且超灵敏的方法。 它可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式进行。 黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶存在下氧化成尿酸以释放过氧化氢，其可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 540nm / 590nm下用Amplite Red特别测量。 使用Amplite 荧光黄嘌呤测定试剂盒，在100μL反应体积中检测到低至0.4μM的黄嘌呤。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Amplite 荧光法黄嘌呤检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备黄嘌呤标准品或测试样品（50 µL）
2.添加黄嘌呤工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm时读取荧光强度

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite Red底物储备液（250X）：
在Amplite Red底物（组分A）的小瓶中加入40 µL DMSO（组分F）。 注意：Amplite Red底物在硫醇（例如二硫苏糖醇（DTT））的存在下不稳定。 反应中DTT的终浓度应不高于10 µM。 由于Amplite Red在pH> 8.5时不稳定，因此应在pH 7-8（建议pH 7.4）下进行测定。

1.2 HRP储备溶液（500X）：
将100 µL测定缓冲液（组分B）加到辣根过氧化物酶（组分C）小瓶中。

1.3 黄嘌呤氧化酶（XO）储备溶液（100X）：
向小瓶黄嘌呤氧化酶（组分E）中加入100 µL测定缓冲液（组分B）制成黄嘌呤氧化酶（XO）储备液（100X）。

2.标准溶液配制

黄嘌呤标准品
将5 µL黄嘌呤标准品（组分D）添加到995 µL测定缓冲液（组分B）中，得到100 µM黄嘌呤标准溶液。 取200 µL 100 µM黄嘌呤标准溶液进行1：3连续稀释，以得到连续稀释的黄嘌呤标准液（X1-X7）。

3.工作溶液配制

将20μL的Amplite Red底物储备液（250X），10μL的HRP储备液（500X）和50μL的黄嘌呤氧化酶储备液（100X）加到5 mL的测定缓冲液（组分B）中，制成总体积 5.08毫升。 注意：避免直接暴露在光线下并立即使用。

样品操作及实验分析

表1.黑色壁/实心底部96孔微孔板中黄嘌呤标准品和测试样品的布局。 X =黄嘌呤标准品（X1-X7，0.137至100 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备黄嘌呤标准品（X），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。

2.在黄嘌呤标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL黄嘌呤工作溶液，使总黄嘌呤测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.在避光条件下，于室温下孵育反应30至60分钟。

4.使用酶标仪在激发= 530-570 nm（*佳540 nm），发射= 590-600 nm（*佳590 nm），截止= 570 nm的条件下监控荧光的增加。