细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒 深红色荧光

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒 深红色荧光

        Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒 深红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADH/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于**诊断和**发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平的增加与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，在生物系统中检测细胞内NAD（P）H具有挑战性。 Cell Meter™细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒提供了监测远光谱中活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法，并且可以与其他应用如GFP表达细胞或MitoTracker的应用相结合。 JJ1902 NAD（P）H是一种优良的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。该荧光探针结合NADH / NADPH，产生高灵敏度和特异性的强荧光信号。 JJ1902 NAD（P）H传感器可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy5®过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒。 

产品说明书

实验样品示例

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.将细胞与测试化合物和JJ1902 NAD（P）H传感器工作溶液在37℃孵育20  –  30分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.在Ex / Em = 590/655 nm（截止= 610 nm）或使用Cy5®过滤器的荧光显微镜下监测荧光强度（底部读取模式）

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.制备工作溶液

将10μL JJ1902 NAD（P）H探针储备溶液（组分A）加入2.5mL测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。该JZL1707 NAD（P）H探针工作溶液在室温下1小时内稳定。

注意：40μL的JZL1707 NAD（P）H传感器原液足以用于一个板

2.实验步骤

①刺激NADP / NADPH，用10μL10X试验化合物（96孔板）或5μL5X试验化合物（384孔板）在无血清培养基或所需缓冲液（如PBS或HHBS）中处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

注意：JJ1902 NAD（P）H探针在血清存在的情况下也是兼容的。探针的条件优化是强烈推荐的细胞系到细胞系。

②在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液。将细胞与测试化合物和JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃共孵育20-30分钟，避光。

注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将HeLa细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃下共培养30分钟。 详细信息请参见图1。

③用所需缓冲液洗涤细胞一次。移除每个孔中的溶液，并添加100μL/孔的测定缓冲液（组分B）用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

④使用底板读取模式在Ex / Em = 590 / 655nm（截止= 610 nm）下使用酶标仪监测荧光增加，或使用荧光显微镜和Cy5®过滤器过滤器获取图像。