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荧光波长最长（红色）—Rhod 2-AM

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荧光波长最长（红色）—Rhod 2-AM 
 
产品编号： R002  CAS号：  
分子式：   分子量：  
EINECS编号：  
在所有的钙离子指示剂中，Rhod 2荧光信号的波长最长。它具有和罗丹明类似的激发和发射波长，分别为557 nm和581 nm。这样的激发波长使得我们很容易就能找到氩和氪光源的激光。尽管有人认为Rhod 2的荧光信号仅仅将钙复合物的荧光增加了数倍，但是Dojindo的Rhod 2由于具有很高的纯度，能有效地将钙荧光信号增加80-100倍左右，使得它的信号强度在所有的钙离子探针里面是最强的。所以，我们强烈建议使用Rhod 2作为探针用激光显微镜来检测细胞内的钙离子情况。有报道称，特别是在神经组织切片培养方面，Rhod 2具有定位点的轮廓线更加清晰的特点。Rhod 2和钙离子的解离常数为（Kd＝ 1.0 mM ），在所有的钙离子荧光探针中是最高的，为监测钙离子浓度提供了一个广阔的范围。Rhod 2-AM是一种Rhod 2的乙酰甲酯衍生物，能非常容易的通过AM法负载到细胞内。

操作说明(for Human T cells)*
试剂: 
2 mM的Rhod 2-AM/DMSO (将1 mg Rhod 2-AM溶于442 µl DMSO) 
Pluronic F127
Hanks’ balanced salt solution (HBSS) 
HEPES buffer saline (10 mM HEPES, 1 mM Na2HPO4, 137 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 5 mMglucose, 0.1% BSA, pH 7.4)

 

操作: 
1. 向Rhod 2-AM/DMSO溶液中加入16.5 mg Pluronic F127，Pluronic F127可以防止Rhod 2-AM在HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。
2. 用HBSS稀释Rhod 2-AM溶液，制备4 µM的Rhod 2-AM working solution。
3. 将Rhod 2-AM working solution加入细胞，在37 ℃培养20分钟。
4. 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。
5. 用HEPES buffer saline洗涤细胞3次，然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成1×105 cells/ml的溶液。
6. 37 ℃下培养10 分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。 
7. 激发波长和发射波长分别为557nm和581nm。 
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。

高强度钙荧光探针Fluo 4-AM

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高强度钙荧光探针Fluo 4-AM 
 
产品编号： F312  CAS号：  
分子式：   分子量：  
EINECS编号：  

Fluo 4是一种将Fluo 3结构中的Cl替换成F的钙荧光探针。由于将Cl替换成了电子吸引力更强的F，它的最大激发波长会向短波长处偏离10 nm左右。这个波长更接近于氩激光器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo 4的荧光强度比Fluo 3强1倍。

由于Fluo 4与钙离子的亲和力和Fluo 3近似(Fluo 3:Kd=0.4 μmol／l、Fluo 4: Kd=0.36 μmol／l)，所以使用上和Fluo 3也基本相同，可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪等仪器检测细胞内钙离子浓度的变化。

Fluo 4-AM是Fluo 4的一种乙酰甲酯衍生物，通过培养，能够轻易进入细胞中。AM进入细胞后会被胞内酯酶所水解，产生的Fluo 4随后会和钙离子(Ca2+)结合并发出荧光。钙离子探针、胞内荧光探针的种类繁多，根据不同的实验要求，实验者的选择性有很多。

Fluo 4-AM (钙离子荧光探针) 需用无水DMSO (anhydrous DMSO)配制。Fluo 4-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo 4-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo 4，从而被滞留在细胞内。

用二甲基亚砜(DMSO)将Fluo 4-AM配制为1~5 mM的原液, -20℃避光密封保存。使用前根据您实验的需要稀释成合适的浓度。

 

试剂名称

分子量

规格

浓度

配制量

Fluo 4-AM

1096.94

1 mg

1 mM

912 μl

50 μg

1 mM

45.6 μl

 

 

例如：需要配制1 mM的原液，用45.6 μl的无水DMSO溶解50 μg的Fluo 4-AM就可以 。

注意事项：

1.  保存方法：1）保存产品时需要密封和保持干燥-20℃保存。
                  2）如果将产品配置好后，也需要密封干燥-20℃保存。
2.  溶解液DMSO：使用新鲜、未开封过的无水DMSO

（开封过的无水DMSO如果吸水，将会影响Fluo 4-AM的稳定性）。
3.  溶解后，尽可能在短时间内用完。长期保存水气容易渗入试剂中。

激发波长：495 nm

发射波长：518 nm

 

 

 

钙荧光探针Fluo 3-AM

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钙荧光探针Fluo 3-AM 
 
产品编号： F026  CAS号：  
分子式：   分子量：  
EINECS编号：  

Fluo 3-AM是一种检测细胞内钙离子的荧光探针。Fluo 3若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与钙离子Ca2+结合后荧光会增加60至80倍，是目前最常用的一种钙离子荧光探针。激光共聚焦荧光显微镜具有氩激光器，所以Fluo 3可被广泛使用于这种显微镜上。这种荧光信号发出来的长波也便于减小对样品细胞的光损伤。Fluo 3也可用来检测紫外光照射下可裂解的螯合钙或其它形式的钙。Fluo 3-AM是Fluo 3的一种乙酰甲酯衍生物，通过培养，能够轻易进入细胞中。

Fluo 3-AM (钙离子荧光探针) 需用无水DMSO (anhydrous DMSO)配制。Fluo 3-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo 3-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo 3，从而被滞留在细胞内。Fluo 3可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506nm，最大发射波长为526nm。

50 μg Fluo 3-AM的配制

 

DMSO（μl）

10

20

30

40

44

50

浓度(mmol/l）

4.4

2.2

1.5

1.1

1.0

0.9

 

 

操作说明(for Human T cells)*
试剂: 
2 mM的Fluo 3-AM/DMSO
Pluronic F127
Hanks’ balanced salt solution (HBSS) 
HEPES buffer saline (10 mM HEPES, 1 mM Na2HPO4, 137 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 5 mMglucose, 0.1% BSA, pH 7.4)

 

操作: 

1. 配制2mM的Fluo 3-AM/DMSO溶液即：将1mg Fluo 3-AM溶于442ulDMSO中（推荐现配现用）。
2. Pluronic F127先用DMSO配制成5%（W/V）的溶液，室温保存。使用时加入到上述Fluo 3-AM/DMSO溶液至终浓度0.05%（W/V）.
    Pluronic F127可以防止Fluo 3-AM在HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。
3. 用HBSS稀释Fluo 3-AM溶液，制备4 µM的Fluo 3-AM working solution。
4. 将Fluo 3-AM working solution加入细胞，在37 ℃培养20分钟。
5. 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。
6. 用HEPES buffer saline洗涤细胞3次，然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成1×105 cells/ml的溶液。
7. 37 ℃下培养10 分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。 
8. 观察528 nm (excitation: 490-500 nm)时的荧光。 
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。

 

 

染色实例：

钙荧光探针Fluo 3-AM

加载了Fluo 3的新鲜分离的大鼠肝脏细胞PE刺激后出现规则胞浆钙振荡。上图为细胞明场图和不同时间点（min）的比例成像，下图为影响Fluo 3荧光强度随时间的变化。成像系统：Photon Technology International Inc.，显微镜Nikon TE2000U，CCD相机QuantEM512S,软件ERP。