丁酰胆碱酯酶（EC 3.1.1.8； BChE），也称为假胆碱酯酶或血浆胆碱酯酶，主要在肝脏中合成，并存在于血液中

Amplite 比色法丁酰胆碱酯酶活性检测试剂盒

丁酰胆碱酯酶（EC 3.1.1.8； BChE），也称为假胆碱酯酶或血浆胆碱酯酶，主要在肝脏中合成，并存在于血液中。BChE是一种非特异性胆碱酯酶，可以水解许多不同的胆碱酯，是抵御有毒化合物进入血液的**道防线。它已被鉴定为有机磷酸中毒的临床生物标志物。Amplite 比色丁酰胆碱酯酶活性测定试剂盒是合成的丁酰胆碱酯类底物，可被BChE水解并产生硫代胆碱。硫胆碱可与5、5′-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（DTNB）反应，并生成黄色发色团，可在410 nm处检测到。该测定方便，灵敏，并且在各种样品中均可检测到低至6 mU / mL。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Amplite 比色法丁酰胆碱酯酶活性检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 准备BChE标准品，测试样品和染料工作溶液
2. 添加BChE标准品或测试样品（100 uL）
3. 添加BChE染料工作溶液（100 uL）
4. 在室温下孵育10-30分钟
5. 检测410±5 nm处的吸光度

注意：开始实验前，在室温下解冻试剂盒所有成分。

溶液配制

储备溶液配制

1.DTNB储备溶液（10倍）：将1.2 mL测定缓冲液（组分B）添加到DTNB（组分A）小瓶中，制成10X DTNB储备溶液，避光。 注意：DNTB不易溶解，看到溶液混浊是正常的。 可以将上清液或混合物用于实验。

2.丁硫代胆碱（BTC）储备溶液（100X）：将120 uL ddH₂O加入BTC小瓶（组分C）中，制成100X BTC储备液。

3.丁胆碱酯酶（BChE）标准溶液（20 U / mL）：将50 uL含0.1％BSA的ddH₂O添加到小瓶丁酰胆碱酯酶标准溶液（组分D）中，制成20 U / mL丁酰胆碱酯酶标准溶液。

标准溶液配制

将20 uL的20 U / mL BChE标准溶液添加到980 uL的测定缓冲液（组分B）中以生成400 mU / mL的BChE标准溶液（BS1）。 然后取400 mU / mL BChE标准溶液（BS7），并在测定缓冲液（组分B）中进行1：2连续稀释，以得到连续稀释的BChE标准溶液（BS2- BS7）。 注意：稀释的BChE标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

工作溶液配制

BChE染料工作溶液：将1.0 mL的10 X DTNB储备溶液和100μL的100X BTC储备溶液添加到9 mL的测定缓冲液（组分B）中，使总体积为10.1 mL的BChE染料工作溶液，避光。

实验步骤

表1.透明的96孔微孔板中的BChE标准品和测试样品的布局。 BS = BChE标准品（BS1-BS7，400至6.5 mU / mL）; BL =空白控件； TS =测试样品

表2.  每个孔的试剂组成

1. 根据表1和表2提供的布局，准备BChE标准品（BS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 uL的试剂代替100 uL。 注意：根据需要处理细胞或组织样品。

2. 将100 uL BChE染料工作溶液添加到BChE标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，使总测定体积为200 uL /孔。 对于384孔板，将25 uL BChE工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 uL /孔。

3. 在避光条件下，于室温下孵育反应10至30分钟。

4. 用酶标仪在410±5 nm处检测吸光度的增加。

图示

图1.使用SpectraMax酶标仪在白色/透明底96孔板中使用Amplite 比色丁酰胆碱酯酶测定试剂盒测量丁酰胆碱酯酶的剂量响应。 孵育10分钟可检测到