荧光法β-羟基丁酸（酮体）检测试剂盒

Amplite 荧光法β-羟基丁酸（酮体）检测试剂盒

        Amplite 荧光法β-羟基丁酸（酮体）检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测羟基丁酸的试剂盒。两种主要的酮体是β-羟基丁酸酯（β-HB）和乙酰乙酸酯（AcAc）。通常这两种主要的酮体在禁食期间（低食量摄入）和长时间运动期间少量存在于血液中。在患有糖尿病，酒精或水杨酸盐中毒，**缺乏症，儿童低血糖症和其他急性**状态的患者中，在血液中发现大量酮体。酮体在血液中的过量生成和积聚（酮病）可导致病理性代谢性酸中毒（酮症酸中毒）。在极端情况下，酮症酸中毒可能是致命的。量化血液中主要酮体β-HB（约75％）的血酮测试方法已用于诊断和监测酮症酸中毒的**。 Amplite 比色法β-羟基丁酸酯检测试剂盒提供了一种灵敏的荧光检测方法，用于测量生物样品中的β-HB水平。该测定基于β-HB的酶偶联反应，其中产物NADH可以通过荧光NADH传感器特别监测。荧光信号可以通过具有在570nm至610nm的波长处的OD比率的吸光度酶标仪来测量。使用此比色法β-羟基丁酸酯测定试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测到低至4μM的β-HB。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Amplite 荧光法β-羟基丁酸（酮体）检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备β-HB工作溶液（50 µL）
2.添加β-HB标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光增加

溶液制备 

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. NAD储备溶液（100X）：
将100 µL H₂O加入NAD小瓶（组分C）中，制成100X NAD储备溶液。

2.β-HB标准溶液（100 mM）：
将1 mL H₂O或1X PBS缓冲液添加到小瓶β-HB标准溶液（组分D）中，制成100 mMβ-HB标准溶液。

2.标准溶液

β-HB标准
向990 µL 1X PBS缓冲液中加入10 µL 100 mMβ-HB标准储备液，以生成1000 µMβ-HB标准溶液（HB7）。取1000 µMβ-HB标准溶液（HB7），并在PBS中进行1：3系列稀释，以得到系列稀释的β-HB标准溶液（HB6-HB1）。 注意：稀释的β-HB标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

3.2 将50 µL NAD储备溶液添加到组分A + B的瓶子中，并充分混合以制成β-HB工作溶液（组分A + B + C）。 注意：此β-HB工作溶液不稳定，请立即使用，并避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.底部透明的96孔微孔板中β-HB标准品和测试样品的布局。 HB =β-HB标准（HB1-HB7，1至1000 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，将β-HB标准品（HB），空白对照（BL）和测试样品（TS）制成黑色96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是50 µL。

2.将50 µLβ-HB工作溶液添加到β-HB标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µLβ-HB工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。

4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（*佳Ex / Em = 540/590 nm，在570 nm截止）下监测荧光的增加。