AAT-Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒无需洗脱,Screen Quest检测试剂盒是一类用于检测各种细胞离子通道以及电位等系列工具，包括膜电位、钙离子流、多**抗性、氯离子以及氯离子通道等方面的指标。每种检测方案均能提供不同的检测方案。AAT-Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒无需洗脱,这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。

简要概述

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测钙离子的试剂盒，Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒提供均匀的荧光测定，用于检测细胞内钙动员。表达通过钙发出信号的感兴趣的GPCR的细胞预加载有可以穿过细胞膜的Fluo-8 NW。一旦进入细胞内，Fluo-8 NW的亲脂性阻断基团被酯酶裂解，导致带电荷的荧光染料留在细胞内。与钙结合后，其荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体发出细胞内钙的释放信号，这显着增加了Fluo-8 NW的荧光。 Fluo-8 NW具有长波长，高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性，是测量细胞钙的理想指标。 Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒为监测G蛋白偶联受体和钙通道提供了一种优化的检测方法。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供*上等的钙检测试剂盒。

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产品说明书

样品分析方案

概述

用含有0.5-1％FBS的Fluo-8 NW染料加载溶液

在生长培养基中制备细胞（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

在室温下孵育1小时

监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

操作步骤

1.准备细胞：
1.1对于粘附细胞：在生长培养基中将细胞过夜，对于96孔板，具有0.5-1％FBS，40,000至80,000个细胞/孔/100μL，或者对于384孔板，为10,000至20,000个细胞/孔/25μL。

1.2对于非粘附细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮于等量的HHBS和Fluo-8 NW染料加载溶液中（参见下面的步骤2.4），125,000至250,000细胞/孔/100μL 用于96孔poly-D赖氨酸平板或30,000至60,000细胞/孔/25μL用于384孔聚-D赖氨酸平板。 在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。
注意：应根据个体评估每个细胞系，以确定细胞内钙动员的*佳细胞密度。

2.准备Fluo-8 NW染料加载溶液：
2.1在使用前，在室温下1小瓶Fluo-8 NW（组分A），1瓶10XPluronic®F127Plus（组分B）和HHBS（组分C）。

2.2Make Fluo-8 NW储备溶液::加入20μL（Cat＃36314）或200μL（Cat＃36315和＃36316）DMSO到Fluo-8 NW（A组分）小瓶中，混匀。
注意：20μLFluo-8 NW原液足以用于一个平板。如果管子密封，未使用的Fluo-8 NW储备溶液可以等分并在<-20摄氏度下储存超过一个月。避光，避免反复冻融循环。

2.3制备1X测定缓冲液：
一个）。对于Cat＃36314（1个试剂盒）和＃36315（10个试剂盒试剂盒），通过将9mL HHBS（组分C）加入10X Pluronic F127 Plus（1mL，组分B）中制备1X测定缓冲液，并充分混合。

B）。对于Cat＃36316（100个试剂盒试剂盒），将整瓶10XPluronic®F127Plus（10 mL，组分B）加入90 mL HHBS缓冲液（不包括在试剂盒中）中，制成1X试剂缓冲液，并充分混合。
注意：对于一个平板，10 mL的1X测定缓冲液就足够了。在<-20℃下等分并储存未使用的1X测定缓冲液。避光，避免反复冻融循环。

2.4为一个细胞板制备Fluo-8 NW染料加载溶液：将20μLFluo-8 NW储备溶液（来自步骤2.2）加入10 mL 1X分析缓冲液（来自步骤2.3），并充分混合。该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

3.运行钙测定：
3.1将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Fluo-8 NW染料加载溶液（来自步骤2.4）加入到细胞板中。
注意：或者，在含有5-10％FBS的生长培养基中培养细胞以改善细胞生长。在这种情况下，重要的是用HHBS缓冲液替换生长培养基以*小化背景荧光和化合物干扰血清。 [我们为那些喜欢保持培养基去除步骤的人提供2个独立的中等去除钙测定试剂盒（Cat＃36308和36309）]。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后将板在室温下再孵育30分钟。
注1：如果测定需要37℃，立即进行实验，无需进一步室温孵育。
注2：如果细胞在室温下运行时间较长，可在室温下孵育细胞板1-2小时（建议孵育时间不超过2小时。）

3.3用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

3.4通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来运行钙通量测定。
注意：在实验前进行信号测试非常重要。不同的仪器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到*大仪器强度计数的10％至15％的水平。例如，FLIPR-384的*大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置以使信号测试强度在7,000到10,000左右。