细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。可以使用多种参数。该特定试剂盒旨在同时检测凋亡，坏死和健康细胞。凋亡被描述为一种主动的，程序性的自主细胞拆卸过程，可避免引起炎症。在凋亡中，磷脂酰丝氨酸（PS）被转移到质膜的外部小叶。作为细胞凋亡初始/中间阶段的通用指标，在观察形态变化之前，可以检测到磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现。该试剂盒中使用的PS指示剂与膜PS结合后会发出红色荧光。膜不透性DNA Nuclear Green DCS1（Ex / Em = 490/525 nm）标记核的能力证明，质膜完整性的丧失代表了晚期细胞凋亡和坏死的简单方法。此外，该试剂盒还提供了活细胞细胞质标记染料CytoCalcein Violet 450（Ex / Em = 405/450 nm），用于标记活细胞细胞质。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪或荧光显微镜同时检测细胞凋亡（红色），坏死（绿色和/或红色）和健康细胞（蓝色）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物制备细胞（200 µL /样品）
2. 添加Apopxin 深红色测定溶液
3. 在室温下孵育30-60分钟
4. 使用具有660/20 nm（用于凋亡-APC通道），530/30 nm（用于坏死-FITC通道）和450/40 nm发射滤光片（用于健康细胞-Pacific blue通道）的流式细胞仪或带有荧光显微镜的细胞分析 DAPI（健康细胞），FITC（坏死细胞）和Cy5滤波片（凋亡细胞）

溶液配制

储备溶液配制

1. CytoCalcein 紫色450储备溶液（200X）：将100 µL DMSO加到CytoCalcein Violet 450（组分D）小瓶中，制成200X CytoCalcein Violet 450储备溶液， 避光。

实验步骤

1.用Apopxin 深红色制备和孵育细胞：

1.1用测试化合物处理细胞一段时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为4-6小时）以诱导凋亡。

1.2离心细胞，得到1-5×10⁵个细胞/管。

1.3将细胞重悬于200 µL分析缓冲液（组分B）中。

1.4向细胞中加入2 µL 100X Apopxin 深红色（组分A）。

1.5可选1：向坏死细胞中加入1 µL 200X Nuclear Green DCS1（组分C）。

1.6可选2：然后向细胞中加入1 µL 200X CytoCalcein Violet 450储备液，以进行健康的细胞染色。

1.7避光保存，于室温下孵育30至60分钟。

1.8在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，添加300 µL分析缓冲液（组分B）以增加体积。

1.9使用流式细胞仪检测荧光强度，该流式细胞仪的荧光强度为660/20 nm（凋亡-APC通道），530/30 nm（坏死-FITC通道）和450/40 nm发射滤光片（健康细胞-Pacific Blue通道）显微镜用DAPI（健康细胞），FITC（坏死细胞）和Cy5滤波片（凋亡细胞）。

2.使用流式细胞仪分析细胞：

2.1使用流式细胞仪分别对Apopxin 深红色结合物进行定量，该流式细胞仪的荧光强度为660/20 nm（凋亡-APC通道），530/30 nm（坏死-FITC通道）和450/40 nm发射滤光片（健康细胞-Pacific Blue通道）。 注意：Apopxin 与贴壁细胞结合的流式细胞仪分析未经过常规测试，因为在细胞分离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤。 

3.使用荧光显微镜分析细胞：

3.1孵育后用移液管吸移细胞悬液，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后用测定缓冲液重悬细胞。

3.2将细胞添加到盖玻片或黑色96孔板的上。注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片（或黑色96孔板）上生长细胞。与Apopxin 深红色孵育后，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后将测定缓冲液加回到盖玻片（或96孔板）中。将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。与Apopxin 深红色孵育后，还可以将细胞固定在2％甲醛中，并在显微镜下观察。

3.3使用Cy5滤光片在荧光显微镜下用Apopxin 深红色分析凋亡细胞。当添加Nuclear Green DCS1时，使用FITC滤波片检测细胞活力；或当向细胞中添加CytoCalcein Violet 450时，使用Violet滤波片检测细胞活力。质膜上的红色染色表明Apopxin 深红色与细胞表面的PS结合。