WST-8细胞增殖与活性检测Cell Counting Kit-8/CCK-8试剂盒，是一种基于SST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8细胞增殖与活性检测Cell Counting Kit-8/CCK-8试剂盒很受欢迎。

检测原理:

◆ Cell Counting Kit 简称CCK8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

◆ WST-8 属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（ formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

◆ CCK8 法应用非常广泛，如**筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

CCK8 方法的优势：

◆ 此图表反映了CCK8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

  ◆ 酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰；

  ◆ 细胞毒性非常低，因此加入 WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到*佳测定时间。

CCK法的操作步骤（更多内容请见说明书）：

实验一：细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5% CO₂）。

2、向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

实验二：细胞增殖-毒性检测

1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO₂）。

2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。

4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉**影响。当然**影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入**后的空白吸收即可。

活力计算：

细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100
A（加药）：具有细胞、CCK溶液和**溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0加药）：具有细胞、CCK溶液而没有**溶液的孔的吸光度
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力