Cell Navigator NBD神经酰胺高尔基染色试剂盒 绿色荧光

Cell Navigator NBD神经酰胺高尔基染色试剂盒 绿色荧光

简要概述

高尔基体是大多数真核细胞胞质内囊泡和折叠膜的复合体，参与分泌和细胞内运输。它修饰内质网（ER）中内置的蛋白质和脂质，并准备将其输出到细胞外。它还在脂质在整个细胞中的运输和溶酶体的形成中起着重要作用。该Cell Navigator™NBD神经酰胺高尔基染色试剂盒提供了一种简便，快速的方法，可以选择性地对活细胞或醛固定细胞中的高尔基染色。将C6 NBD神经酰胺与牛血清白蛋白（C6-NBD-Ceramide-BSA）形成复合物给予细胞。高尔基体通过形成相应的荧光代谢产物而被染色。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 根据需要处理细胞
2. 加入C6 NBD神经酰胺工作溶液，在室温或37°C下孵育15〜30分钟
3. 更换染色缓冲液，在室温或37°C下孵育15〜30分钟
4. 使用FITC滤镜套件在显微镜下观察
5. 可选：用4％甲醛固定细胞

储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. C6 NBD神经酰胺储备溶液（100X）：
将100 µL DMSO（组分C）加入小瓶C6 NBD神经酰胺（组分A）中并充分混合。注：将未使用的C6 NBD神经酰胺原液在-20℃保存。避免冻融循环。

工作溶液配制

1. C6 NBD神经酰胺工作液：
将10 µL NBD神经酰胺原液（100X）添加到990 µL染色缓冲液（组分B）中，制成NBD神经酰胺工作液。
可选：将10 µL Hoechst 33342（组分D）添加到1mL NBD神经酰胺工作溶液中以进行核染色。

操作步骤

1. 接种并根据需要处理细胞。
2. 直接在细胞培养基中加入100µL C6 NBD神经酰胺工作溶液。
3. 在室温或37°C下孵育15〜30分钟。
4. 除去C6 NBD神经酰胺工作溶液，并用100 µL /孔的染色缓冲液（组分B）代替。
5. 在室温或37°C下孵育10〜15分钟。
6. 在装有FITC滤光片的荧光显微镜下观察。
7. 从步骤4中除去染色缓冲液，然后向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。 注意：对于非贴壁细胞，请添加所需量（例如2X10⁶细胞/ mL）的4％甲醛固定液。（可选）
8. 在室温下将平板孵育20至30分钟。 去除固定剂。 用PBS洗涤细胞2-3次，然后用100 µL /孔的染色缓冲液（组分B）替换。（可选）

图例

图1. HeLa细胞中NBD神经酰胺高尔基染色的荧光图像。 细胞在37°C下用100 µL C6 NBD神经酰胺工作溶液染色20分钟，然后用Hoechst 33342染色。 高尔基体被认为是部分包围细胞核的强烈荧光线状结构。