荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光

Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 深红色荧光

Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ROS的试剂盒，活性氧（ROS）是氧正常代谢的天然副产物，在细胞信号传导中起重要作用。ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管**，糖尿病，骨质疏松症，中风，炎性**，许多神经退行性**和癌症中的作用已得到公认。ROS测量将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒使用我们专有的ROS Brite 670探针来定量活细胞中的ROS。与ROS反应后，可渗透细胞且无荧光的ROS Brite 670表现出很强的荧光信号。ROS Brite 670探针位于细胞质中。ROS Brite 670探针的荧光信号可以通过荧光显微镜，高含量成像，荧光酶标仪或流式细胞仪进行测量。Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法，可在孵育1小时内检测活细胞中的细胞内ROS（尤其是超氧化物和羟基自由基）。可以使用荧光酶标仪或带有Cy5滤光片的荧光显微镜以方便的96孔或384孔板进行检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

适用于荧光酶标仪、荧光显微镜

1.在生长培养基中制备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.添加ROS Brite 670工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）
4.将细胞在37℃下染色30-60分钟
5.在Ex / Em = 650/675 nm（截止= 665 nm）或使用TRITC滤光片组的荧光显微镜下检测荧光（底部读取模式）

适用于流式细胞仪

1.在生长培养基中制备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.将ROS Brite 670与细胞一起孵育30-60分钟
4.使用具有FL2通道的流式细胞仪监测荧光强度

溶液配制

1.储备溶液配制

        除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. ROS Brite 670原液（500X）：
将40μLDMSO（组分C）加入到ROS Brite 670（组分A）的小瓶中并充分混合以制备500X ROS Brite 670储备溶液。 避光。 注意：20μL的500X ROS Brite 670原液足以容纳1个平板。对于流式细胞仪，为方便起见，可将5倍ROS Brite 670储备液稀释5倍至DMSO中。为了存放，请将管子紧紧密封。

2.工作溶液配制

        将20μL500XROS Brite 670储备溶液加入10 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成ROS Brite 670工作溶液。 注意：此ROS Brite 670工作溶液在室温下稳定至少2小时。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

（适用于荧光酶标仪、荧光显微镜）

1.用10μL10X测试化合物（96孔板）或5μL5X测试化合物（384孔板）在所需缓冲液（如PBS或HHBS）中处理细胞。对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。

2.为了诱导ROS，将细胞板在室温下或在5％CO₂,37℃培养箱中孵育一段时间（例如：用100μMTBHp处理Hela细胞30分钟）。

3.向细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的ROS Brite 670工作溶液。

4.将细胞在5％CO₂,37℃培养箱中孵育30分钟至60分钟。

5.使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 650 / 675nm（截止值= 665nm）检测荧光增加，或使用具有TRITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

（适用于流式细胞仪）

1.以5×10⁵至1×10⁶个细胞/ mL的密度制备细胞。 注意：应根据个体评估每个细胞系，以确定诱导细胞凋亡的*佳细胞密度。

2.用所需缓冲液（如PBS或HHBS）处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。

3.为诱导ROS，将细胞板在室温或5％CO₂,37°C培养箱中孵育至少30分钟（用100μM（TBHP）处理的Hela细胞30分钟）。

4.将1μL/ mL细胞的500X ROS Brite 670储备溶液或5μL/ mL细胞的100X ROS Brite 670储备溶液加入细胞培养基中。

5.将细胞在5％CO₂,37℃培养箱中孵育30至60分钟。

6.使用具有FL2通道的流式细胞仪检测荧光强度。

数据分析