上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
- 产品名称:荧光法丙酮酸检测试剂盒
- 产品货号:13820
- 产品品牌:AAT Bioquest
简单介绍
金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供上等的Amplite 荧光法丙。酮酸检测试剂盒。
产品描述
Amplite Fluorimetric Pyruvate Assay Kit
货号 | 13820 | 存储条件 | f/l |
规格 | 200 Tests | 价格 | |
Ex (nm) | 571 | Em (nm) | 585 |
分子量 | 溶剂 | ||
产品详细介绍 |
Amplite 荧光法Fluorimetric Pyruvate Assay Kit是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙.酮酸的试剂盒,丙。酮酸是细胞内代谢途径中的重要化合物。它来源于称为糖酵解的葡萄糖代谢。一分子葡萄糖分解成两个丙。酮酸分子,通过两种方式之一提供活细胞能量。当氧气存在时(有氧呼吸),丙。酮酸被丙。酮酸脱氢酶转化为乙酰-CoA,丙。酮酸脱氢酶进入柠檬酸循环(也称为三羧酸循环)产生ATP。当氧气不足时,丙。酮酸盐会厌氧分解,在动物体内产生乳酸盐,在植物和微生物体内产生乙醇。丙。酮酸盐的异常水平或乳酸盐与丙。酮酸盐的浓度比可能与肝脏**或代谢紊乱有关,并且是患者临床和其他实验室研究中的一种诊断测量。 AAT Bioquest的Amplite 比色丙。酮酸测定试剂盒提供了一种灵敏的比色测定法,用于定量样品中的丙。酮酸。它利用释放过氧化氢的酶偶联反应,可通过吸光度酶标仪在575 nm处通过丙。酮酸盐传感器检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供上等的Amplite 荧光法丙。酮酸检测试剂盒。
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备测试样品(50 µL)以及连续稀释的丙。酮酸标准液(50 µL)
2.加入等体积的丙。酮酸工作溶液(50 µL)
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Quest Fluor 丙。酮酸传感器储备溶液(200X):
将55 µL DMSO(组分E)添加到Quest Fluor 丙。酮酸传感器(组分A)中,制成200X Quest Fluor 丙。酮酸传感器储备溶液。
1.2 丙。酮酸标准溶液(1 mM):
将10 µL 100 mM丙。酮酸盐(组分D)添加到990 µL PBS(pH 7)中,得到1 mM丙。酮酸盐溶液。
2.标准溶液
丙。酮酸标准
将100 µL的1 mM丙。酮酸标准溶液加入900 µL PBS中制成100 µM丙。酮酸溶液(PS7)。 然后执行1:3连续稀释以获得连续稀释的丙。酮酸标准品(PS6-PS1)。
3.工作溶液
3.1 将5 mL测定缓冲液(组分C)加入一瓶酶混合1瓶(组分B1)中; 混合均匀。
3.2 将100μLddH2O加入一个酶混合物2小瓶(组分B2)中; 混合均匀。
3.3 将整个小瓶(100μL)的Enzyme Mix 2和25 uL的200X Quest Fluor 丙。酮酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中。 混合均匀。 注意:丙。酮酸工作溶液不稳定,应立即使用,避免光照。
样品操作及实验分析
表1.黑色96孔微孔板中丙。酮酸标准品和测试样品的布局。 PS =丙。酮酸标准溶液(PS1-PS7,0.1至100 µM); BL =空白对照; TS =测试样品。
BL | BL | TS | TS |
PS1 | PS1 | … | … |
PS2 | PS2 | … | … |
PS3 | PS3 | ||
PS4 | PS4 | ||
PS5 | PS5 | ||
PS6 | PS6 | ||
PS7 | PS7 |
表2.每个孔的试剂组成
孔 | 容积 | 试剂 |
PS1-PS7 | 50ul | 连续稀释(0.1至100 µM) |
BL | 50ul | PBS |
TS | 50ul | 样品 |
1.根据表1和表2提供的布局,将丙。酮酸标准液(PS),空白对照(BL)和测试样品(TS)制备成黑色的96孔微孔板。对于384孔板,请使用25 µL 每孔试剂,而不是50 µL。
2.在丙。酮标准液,空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL丙。酮酸工作溶液,使丙。酮酸测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板,请向每个孔中添加25 µL工作溶液,总体积为50 µL /孔。 在6.5至7.0的pH值下运行丙。酮酸盐测定。
3.将反应混合物在室温下孵育30分钟至1小时。
4.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm(截止:570 nm)下监测荧光的增加。