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- 产品名称:谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒
- 产品货号:11560
- 产品品牌:AAT Bioquest
简单介绍
通过这种荧光测定GPx测定,我们能够在155μL反应体积中检测低至1.2 mU / mL的GPx。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供上等的Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒。
产品描述
Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光
货号 | 11560 | 存储条件 | f/l |
规格 | 200 Tests | 价格 | |
Ex (nm) | 420 | Em (nm) | 480 |
分子量 | 溶剂 | ||
产品详细介绍 |
Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的检测谷胱甘肽过氧化物酶的试剂盒,谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)是具有过氧化物酶活性的酶家族,以保护生物体免受氧化损伤。GPx在将有机氢过氧化物(例如脂质氢过氧化物)还原成其相应的醇或将游离过氧化氢还原成水。因此,它可以防止细胞膜和细胞中其他氧化剂敏感位点的氧化损伤。现在科研已经注意到,改变GPx水平与由许多评论和复杂**引起的损伤相关。在生物样品中测量GPx水平,作为潜在**癌症,糖尿病,神经退行性**和心血管**的潜在指标。AAT Bioquest的荧光谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒提供灵敏的荧光测定法,用于测量生物样品中的GPx水平。该测定基于GPx催化的谷胱甘肽(GSH)氧化成氧化型谷胱甘肽(GSSG)。生成的GSSG通过谷胱甘肽还原酶(GR)和NADPH再循环至还原态GSH:
R-O-O-H + 2GSH GPx R-O-H + GSSG + H2O
GSSG + NADPH + H+ GR 2GSH + NADP+
产品NADP +可以使用我们新开发的专有NADP传感器Quest Fluor™NADP Probe进行专门监控。 NADP传感器仅与NADP反应产生荧光产物。 荧光信号可以用荧光酶标仪在Ex / Em = 420 / 480nm处测量,其与GPx活性成正比。与测量NADPH在340 nm处吸光度降低的其他商业试剂盒相比,我们的Quest Fluor™NADP探针可用于直接量化NADP水平。通过这种荧光测定GPx测定,我们能够在155μL反应体积中检测低至1.2 mU / mL的GPx。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供上等的Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒。
产品说明书
96孔板的测定方案
概述
准备GPx分析混合物(50μL)
添加GPx标准品或测试样品(50μL)
在室温下孵育30分钟
加入20μLQuestFluor™NADP探针
添加20μLNAP检测溶液
在室温下孵育10-20分钟
添加15μL增强剂
溶液在室温孵育30-60分钟,在Ex / Em = 420 / 480nm处记录荧光
注意1.为了获得*佳效果,强烈建议使用黑色版。
注意2.在开始实验之前,在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。
操作方法
1.制备谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)标准储备液:
将50μLddH2O或1×PBS缓冲液加入到GPx标准品(组分A)的小瓶中,制成10U / mL标准储备溶液。
注意:未使用的GPx标准储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20ºC。
2.准备GPx标准的系列稀释液:
2.1将4μLGPx标准储备溶液(10U / mL,来自步骤1)加入996L 1×PBS缓冲液中,以产生浓度为40mU / mL的标准溶液。
注意:稀释的GPx标准溶液不稳定,应在4小时内使用。
2.2取200μL40mU / mL GPx标准溶液进行1:2连续稀释,得到大约20,10,5,2.5,1.25,0.625和0 mU / mL的GPx标准品系列稀释液。
2.3如表1和2中所述,将GPx标准品和含有GPx的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。
表1实心黑色96孔微孔板中GPx标准品和测试样品的布局
BL |
BL |
TS |
TS |
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GP 1 |
GP 1 |
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GP 2 |
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GP 3 |
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GP 4 |
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GP 5 |
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GP 6 |
GP 6 |
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GP 7 |
GP 7 |
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注意:GP = GPx标准,BL =空白对照,TS =测试样品。
表2每个孔的试剂组成
GPx Standard |
Blank Control |
Test Sample |
Serial Dilutions*: 50 μL |
1×PBS Buffer : 50 μL |
50 μL |
*注意:将连续稀释的GPx标准品从大约0.6 mU / mL加到40 mU / mL,一式两份加入GP1到GP7的孔中。
3.准备GSH原液(100X):
将100μlddH2 O加入到GSH小瓶(组分D)中以制备100X GSH储备溶液。
4.准备GPx底物储备液(100X):
将100μlddH2O加入到基质小瓶(组分E)中以制备100X底物储备溶液。
5.准备GPx分析混合物:
5.1将5 mL测定缓冲液(组分B)加入一瓶酶混合物(组分C)中。
5.2将50μLGSH储备溶液(来自步骤3的组分D),50μL底物储备溶液(组分E,来自步骤4)加入到组分B + C的瓶子中(来自步骤5.1),并充分混合以进行GPx测定 混合物(组分B + C + D + E)。
注1:该GPx测定混合物足以用于一个96孔板。 它不稳定,请及时使用。
注2:不建议储存未使用的GPx分析混合物。 可以将未使用的组分B + C混合物(来自步骤5.1)分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC,尽管灵敏度可能会降低。
注3; 将未使用的100X GSH储备溶液(来自步骤3)和100X GPx底物储备溶液(来自步骤4)分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC。
6.运行GPx分析:
6.1将50μLGPx测定混合物(来自步骤5.2)加入到GPx标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(参见步骤2.3),使总体积为100μL/孔。
注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μLGPx测定混合物。
6.2在室温下孵育反应30分钟,避光。
7.运行NADP测定:
7.1将20μLQuestFluor™NADP探针(组分F)加入到GPx标准品,空白对照品和测试样品的每个孔中,充分混合。
7.2在每个孔中加入20μLNAP检测溶液(组分G),充分混匀。
注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和10μLQuestFluor™NADP探针(组分F)和10μLNAP检测溶液(组分G)。
7.3在室温下孵育反应10-20分钟,避光。
7.4向每个孔中加入15μL增强剂(组分H),使总测定体积为155μL/孔,并在室温下孵育30-60分钟,避光。
注意:对于384孔板,添加7.5μL增强剂。
7.5使用荧光读板仪在Ex / Em = 420/480 nm处监测荧光增加。