钙黄绿素, AM是美国AAT Bioquest生产的用于细胞活力测定的试剂，钙黄绿素，也称为荧光素，荧光素复合物，是一种荧光钙指示剂，其激发和发射波长分别为495和515nm。钙黄绿素在100 mM以上的浓度下会自动猝灭。它用作EDTA滴定钙离子和荧光测定钙的络合指示剂，微溶于水。质子解离常数为pKa1的= 2.1，pKa2 = 2.9，pKa3 = 4.2，pKa4 = 5.5，pKa5 = 10.8和pKa6 = 11.7。钙黄绿素溶液在酸性条件下发出黄绿色荧光，而在碱性条件下不发出荧光。但是，钙黄绿素在碱性条件下在金属离子（例如Al，Ba，Cu，Mg和Zn）存在下发出荧光。因此，钙黄绿素还可以用于除Ca之外的这些重金属离子的直接荧光滴定。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供*上等的钙黄绿素。

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产品说明书

使用细胞活力指标AM酯类

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性将各种极性荧光探针加载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们在溶液中易于水解。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）溶解。 DMSO储备溶液可以在20℃下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯可以稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5mM AM酯的储备溶液。非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加AM酯的水溶性。

注意：在稀释到上样缓冲液中之前，可将等体积的20％Pluronic®F-127溶液添加到细胞活力指示剂的DMSO储备溶液中。*终的Pluronic®F-127浓度约为0.02％。

注意：不建议长期储存含有Pluronic®F-127的AM酯。

b）在实验当天，要么将细胞活力的固体指示剂溶解在DMSO中，要么将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，建议*终浓度范围为4至5μM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37℃下将细胞与AM酯孵育20分钟至1小时。

d）在不含细胞活力指示剂的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂）中洗涤细胞以除去过量的探针。

注意：通过流式细胞术立即分析细胞样品，以保证每个细胞的平均荧光。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验 。