TUNEL凋亡检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 绿色荧光

简要概述

DNA片段化代表晚期细胞凋亡的特征。凋亡细胞中的DNA断裂可以通过末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）检测。 TUNEL测定法依赖于DNA中存在的缺口，该缺口可通过TdT进行鉴定，TdT是一种酶，该酶催化添加标记物的dUTP。该试剂盒基于将我们专有的荧光染料掺入凋亡过程中形成的DNA片段中。该测定法经过优化，可直接检测分离的或贴壁细胞中的细胞凋亡，而无需使用任何抗体。该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。适用于荧光酶标仪，荧光显微镜或流式细胞仪。在流行的FITC通道上可以轻松检测到其信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物准备细胞。
2. 与TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分钟至1小时。
3. 洗涤细胞。
4. 用4％甲醛（可选）固定细胞。
5. 用带FITC滤光片的荧光显微镜或带FITC通道的流式细胞仪。读取Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）处的荧光强度。

溶液配制 

工作溶液配制

将0.5μL的100X Tunnelyte Green（组分A）添加到50μL的反应缓冲液（组分B）中，使总体积为50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。 注意：应单独评估每个细胞系，以确定*佳细胞密度。

实验步骤

1.根据您的特定协议，将细胞培养至*佳密度以诱导凋亡。 对于在96孔板培养物中生长的贴壁细胞，我们建议大约30,000至50,000个细胞/孔，对于非贴壁细胞，建议大约1至2 x 10⁶细胞/ mL。 同时，在每种标记条件下，用诱导群体相同的密度培养非诱导阴性对照细胞群体。 注意：我们用100 nM-1 µM星形孢菌素处理HeLa细胞4小时，以诱导细胞凋亡。

2.染色和固色：

2.1取出细胞培养基。
2.2向每个样品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分钟。
2.4除去TUNEL工作溶液，并用200 µL /孔的PBS洗涤细胞1-2次。
2.5向每个样品中添加100uL反应缓冲液（组分B）。
2.6使用Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）的荧光酶标仪，带有FITC滤光片组的荧光显微镜或带有FITC通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.7可选：从步骤5中移出反应缓冲液，并向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。注意：对于非贴壁细胞，请添加所需量（例如2X10⁶细胞/ mL）的4％甲醛固定液。
2.8在室温下将平板孵育20至30分钟。
2.9去除固定剂。
2.10用PBS洗涤细胞2-3次，并用100µL PBS /孔/ 96孔板替换。
2.11使用Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）的荧光酶标仪，带有FITC滤光片组的荧光显微镜或带有FITC通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.12可选：用1X Hoechst（组分C）在Ex / Em = 350/460 nm处染色细胞核，以进行图像分析