Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞凋亡的试剂盒，DNA片段化代表晚期细胞凋亡的特征。凋亡细胞中的DNA片段化可以通过末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）来检测。 TUNEL测定依赖于DNA中缺口的存在，其可以通过TdT鉴定，TdT是催化添加用标记二次标记的dUTP的酶。 所有现有的TUNEL测定都含有高毒性的二甲胂酸钠，它可能诱导细胞凋亡并减少DNA产生和DNA链。 我们的Cell Meter™TUNEL细胞凋亡检测试剂盒使用不含二甲胂酸钠的专有缓冲系统。 该试剂盒基于在凋亡过程中形成的DNA片段的3’OH末端掺入荧光染料TF3修饰的脱氧尿苷5′-三磷酸（TF3-dUTP）。 该测定被优化用于在不使用抗体的情况下直接检测分离的或附着的细胞中的细胞凋亡。

        该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。适用于荧光酶标仪，荧光显微镜或流式细胞仪。在Ex / Em = 550nm / 590nm处可以容易地检测其信号。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供*上等的细胞凋亡检测试剂盒。

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产品说明书

样品分析方案

概述

用测试化合物制备细胞用4％甲醛固定细胞

用37℃的反应混合物孵育1小时

洗涤并在Ex / Em = 550/590 nm处分析细胞

注意：在室温下解冻组分C，使用前将组分A和B保存在冰上。

操作步骤

1.根据您的特定方案，将细胞培养至*佳密度以诱导细胞凋亡。

对于在96孔微孔板培养物中生长的贴壁细胞，我们推荐约30,000至50,000个细胞/孔，对于非贴壁细胞，推荐约1至2×10 6个细胞/ mL。 同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。 以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：

1）用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2）用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3）用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4）用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

2.固定和染色

2.1移除细胞培养基。

2.2向每个孔中加入100μL/孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。

注意：对于非贴壁细胞，添加所需量（如2 x 106个细胞/ mL）的4％甲醛固定缓冲液。

2.3在室温下孵育板20至30分钟。

2.4去除固定剂。

可选：如果需要，在固定后加入100μL/孔/ 96孔板的透化试剂（0.2％Triton X-100，在PBS中，未提供），并在室温下孵育平板10分钟。

2.5用PBS洗涤细胞2-3次。

可选：您也可以使用DNAase I通过在室温下用DNA酶I消化细胞30分钟来制备TUNEL反应的阳性对照，然后进行TUNEL反应（步骤3）

3.TUNEL反应

3.1根据待测样品的数量，在使用前准备反应混合物（见说明书）

3.2将50μL反应混合物（来自步骤3.1）加入每个孔或管中，并在37℃下孵育60分钟。

3.3取出反应混合物，用200μL/孔的PBS洗涤细胞3-5次。

4.通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 550 / 590nm处监测荧光强度。

5.可选：用1X Hoechst（组分C，Ex / Em = 350 / 460nm）染色细胞核用于图像分析。