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- 产品名称:iFluor 488 Styramide * Alexa Fluor 488酪胺
- 产品货号:45020
- 产品品牌:AAT Bioquest
简单介绍
Power Styramide 信号放大(PSA)系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标*灵敏的方法之一,其荧光信号强度比广泛使用的tyramide(TSA)试剂高10-50倍
产品描述
货号 | 45020 | 存储条件 | f/l |
规格 | 100 Slides | 价格 | |
Ex (nm) | 491 | Em (nm) | 516 |
分子量 | 1037.99 | 溶剂 | DMSO |
产品详细介绍 |
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Power Styramide 信号放大(PSA)系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标*灵敏的方法之一,其荧光信号强度比广泛使用的tyramide(TSA)试剂高10-50倍。当与iFluor 染料结合使用时,iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度(超过100倍)的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶(HRP)来催化活性原位共价沉积荧光团,PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多,这使PSA系统比传统的TSA试剂更快,更耐用,更灵敏。与酪酰胺试剂相比,Styramide 缀合物具有更高效率标记靶标的能力,因此产生更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比、与相同水平的敏感性相比,Styramide 偶联物还可以明显减少**抗体的消耗。iFluor 488 Styramide是Alexa Fluor 488酪酰胺或其他光谱相似的荧光酪酰胺缀合物或TSA试剂的优良替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*上等的iFluor 488 Styramide。
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产品说明书
样品实验方案
简要概述
- 修复/透化细胞或组织
- 在封闭缓冲液中添加一抗
- 加入结合HRP的二抗
- 准备Styramide工作溶液,并在室温下添加到细胞或组织中(5-10分钟)
溶液配制
储备溶液配制
1.Styramide 储备溶液(100X):将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中,制成100X Styramide 储备溶液。注意:一次性使用等分试样,并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存,并避免重复冻融循环。
2.H2O2储备溶液:将90 µL的ddH2O加入10 µL 3%过氧化氢中(未提供)。注意:在使用当天准备新鲜的100X H2O2溶液,做到现用现配。
工作溶液配制
1.Styramide 工作溶液(1X):每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H2O2储备溶液。注意:盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液,(提供的Styramide 足以进行100次测试。)注意:必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液,并避免直接暴露在光线下。
2.二级抗体-HRP工作溶液:根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。
实验步骤
(该步骤适用于细胞或组织染色)
细胞固定和透化
1.在室温下用3.7%甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。
2.用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.在室温下用0.1%Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。
4.用PBS冲洗细胞或组织两次。
组织固定,脱石蜡和补液
(根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。)
过氧化物酶标记
1.可选:通过在过氧化物酶淬灭溶液(例如3%过氧化氢)中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性,然后在室温下用PBS冲洗两次。
2.可选:如果使用结合HRP的链霉亲和素,建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。
3.在4°C下用封闭溶液(例如含1%BSA的PBS)封闭30分钟。
4.除去封闭溶液,并添加稀释好的一抗,在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。
5.用PBS洗涤3次,每次5分钟。
6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中,并在室温下孵育60分钟。注意:孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。
7.用PBS洗涤3次,每次5分钟。
Styramide标记
1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液,并在室温下孵育5-10分钟。 注意:如果您观察到非特异性信号,则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的*佳孵育时间,或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。
2.用PBS冲洗3次。
复染和荧光成像
1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂,如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。
2.加上盖玻片。
3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。
表1.建议用于核复染色的产品。
货号 | 产品名称 | Ex/Em(nm) |
17548 | 核蓝 DCS1 | 350/461 |
17550 | 核绿 DCS1 | 503/526 |
17551 | 核橙 DCS1 | 528/576 |
17552 | 核红 DCS1 | 642/660 |
图示
图1.Power Styramide 信号放大(PSA)系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标*灵敏的方法之一,其荧光信号强度比广泛使用的tyramide(TSA)试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性,iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度(超过100倍)的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶(HRP)的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多,这使PSA系统比传统的TSA试剂更快,更耐用,更灵敏。 |
图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide(左)或AlexaFluor |