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Annexin V-iFluor 594偶联物 货号：20073.-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品名称：Annexin V-iFluor 594偶联物
  • 产品货号：20073.
  • 产品品牌：AAT Bioquest

简单介绍

金畔生物优异你看的见： （一）、AAT Bioquest中国**战略合作伙伴金畔生物——生物光谱技术的***，每周都有发货补充，货期短到您意想不到，满足客户的需求就是我们的宗旨，只要您下单，我们就能保证您在短期内收到所需产品。 （二）、新一代荧光染料分子与目标分子严格定量，光信号稳定，能非常准确地反映目标分子的真实情况。

产品描述

Annexin V-iFluor 594标记

Annexin V-iFluor 594偶联物 货号：20073.

货号 20073                          存储条件 f/l                     
规格                            100 tests
Ex (nm) 588 Em (nm) 604
分子量 ~36000 溶剂 Water
产品详细介绍

        Annexin V-iFluor 594标记是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞功能的探针，膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。 它们富含真核生物，属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。 膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰丝氨酸（PS），其通常保持在细胞膜的内叶（细胞质侧）。 在细胞凋亡中，PS被转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示，并且可以在观察到形态变化之前检测到。 我们的膜联蛋白V结合物是一组监测细胞功能的工具，旨在通过测量磷脂酰丝氨酸的易位来监测细胞凋亡。

        膜联蛋白V结合物在Ca2+存在下与凋亡细胞表面上的PS结合，它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的PS结合。 因此，我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白V结合物结合使用，以区分死细胞和凋亡细胞。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Annexin V-iFluor 594检测试剂。 

产品说明书

分析方案

概述

用测试化合物（200μL/样品）制备细胞

添加Annexin V结合物测定溶液

室温孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞：

1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液：10mM HEPES，140mM NaCl和2.5mM CaCl2，pH 7.4。

1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.3离心细胞，得到1-5×105个细胞/管。

1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。

1.5在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选：在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭，用于坏死细胞。

1.6在室温下孵育30至60分钟，避光。

1.7在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μL膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）以增加体积（参见下面的步骤1.8）。

1.8使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度（参见下面的步骤2或3）。

2.使用流式细胞仪分析：

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意：粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人（见参考文献1和2）。

3.使用荧光显微镜分析：

3.1移取步骤1.6的细胞悬液，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）重悬细胞。 将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意：对于粘附细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。 与膜联蛋白V缀合物孵育（步骤1.6）后，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，并将膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。 在与膜联蛋白V缀合物孵育后，细胞也可以在2％甲醛中固定，并在显微镜下观察。

3.2在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞

数据分析

        下图是使用流式细胞仪检测膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸在Jurkat细胞凋亡中的结合活性的实例。 在活的非凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。 在凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上，导致染色强度增加。

Annexin V-iFluor 594偶联物 货号：20073.

图1.在Jurkat细胞中检测膜联蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰丝氨酸的结合活性。 将Jurkat细胞在37℃，5％CO2培养箱中不用（蓝色）或用1μM星形孢菌素（红色）处理5小时，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分钟。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式细胞仪，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下测量膜联蛋白V-mFluor Violet 450的荧光强度。

Alexa Fluor647 Cy5的**替代品iFluor 647琥珀酰SE 货号：1031-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品名称： Alexa Fluor647 Cy5的**替代品iFluor 647琥珀酰SE
  • 产品货号：1031
  • 产品品牌：AAT Bioquest

简单介绍

金畔生物优异你看的见： （一）、AAT Bioquest中国**战略合作伙伴金畔生物——生物光谱技术的***，每周都有发货补充，货期短到您意想不到，满足客户的需求就是我们的宗旨，只要您下单，我们就能保证您在短期内收到所需产品。 （二）、新一代荧光染料分子与目标分子严格定量，光信号稳定，能非常准确地反映目标分子的真实情况。

产品描述

 
iFluor 647琥珀酰亚胺酯
Alexa Fluor647 Cy5的**替代品iFluor 647琥珀酰SE 货号：1031

货号                1031                 存储条件              F/L                   
规格 1 mg
Ex (nm) 649 Em (nm) 664
分子量 ~1200 溶剂 DMSO

iFluor 647琥珀酰亚胺酯是iFluor系列荧光标记染料之一，

可以覆盖整个可见光谱。所有iFluor 染料都具有优异的水溶性，它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。与常规的染料(如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7)相比，iFluor 染料具有更好的标记性能。一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。它们是用于标记蛋白质和核酸的极便宜的荧光染料（替代Alexa Fluor 染料）。每种iFluor染料的开发都与特定的Alexa Fluor 或其他标记染料（如DyLight 染料）的光谱特性相匹配。

琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的**试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1.溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2.反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3.反应缓冲液：使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺（如Tris和甘氨酸）和硫醇化合物的缓冲液。广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）也必须在进行染料缀合之前除去（例如通过透析）。 4.反应温度：大多数缀合在室温下进行。特定标记反应可能需要升高或降低的温度。iFluor系列染料是AF系列染料的**替代品。

产品光谱图
Alexa Fluor647 Cy5的**替代品iFluor 647琥珀酰SE 货号：1031

点击查看实验方案

Alexa Fluor647 Cy5的**替代品iFluor 647琥珀酰SE 货号：1031

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产品说明书

染色样本分析

操作步骤

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL，再加入1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去硫柳汞，以获得**标记结果。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得**标记效率，建议*终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B），及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。

3.确定*佳染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定*佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）。

3.6检测上述4种结合物，确定*佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。

4.运行结合反应：

4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。

注意：溶液B /溶液的*佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

图示

Alexa Fluor647 Cy5的**替代品iFluor 647琥珀酰SE 货号：1031

图1. HeLa细胞先用小鼠抗微管蛋白染色，再用iFluor™ 647山羊抗小鼠IgG（H + L）（红色）染色； 细胞核用DAPI（蓝色）染色。

Alexa Fluor647 Cy5的**替代品iFluor 647琥珀酰SE 货号：1031

图2. HeLa细胞分别与小鼠抗微管蛋白和AAT的iFluor™ 647山羊抗小鼠IgG偶联物（红色，左）或AlexaFluor®647山羊抗小鼠IgG（红色，右）一起孵育。 细胞核用Hoechst 33342（蓝色，目录号17530）染色。

Alexa Fluor647 Cy5的**替代品iFluor 647琥珀酰SE 货号：1031

图3.将HeLa细胞与小鼠抗微管蛋白和生物素山羊抗小鼠IgG一起孵育，然后分别与AAT的iFluor™647-链霉亲和素缀合物（红色，左）或链霉亲和素与AlexaFluor®647（红色，右）缀合。

Alexa Fluor 555 iFluor 555琥珀酰SE 货号：1028-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品名称： Alexa Fluor 555 iFluor 555琥珀酰SE
  • 产品货号：1028
  • 产品品牌：AAT Bioquest

简单介绍

金畔生物优异你看的见： （一）、AAT Bioquest中国**战略合作伙伴金畔生物——生物光谱技术的***，每周都有发货补充，货期短到您意想不到，满足客户的需求就是我们的宗旨，只要您下单，我们就能保证您在短期内收到所需产品。 （二）、新一代荧光染料分子与目标分子严格定量，光信号稳定，能非常准确地反映目标分子的真实情况。

产品描述

 

iFluor 555琥珀酰亚胺酯
Alexa Fluor 555 iFluor 555琥珀酰SE 货号：1028

货号                         1028                        存储条件                      F/L                           
规格 1 mg
Ex (nm) 552 Em (nm) 567
分子量 1125.26 溶剂 DMSO

iFluor 555琥珀酰亚胺酯是iFluor系列荧光标记染料之一，可以覆盖整个可见光谱。所有iFluor 染料都具有优异的水溶性，它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。与常规的染料(如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7)相比，iFluor 染料具有更好的标记性能。一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。它们是用于标记蛋白质和核酸的极便宜的荧光染料（替代Alexa Fluor 染料）。每种iFluor染料的开发都与特定的Alexa Fluor 或其他标记染料（如DyLight 染料）的光谱特性相匹配。

琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的**试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1.溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2.反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3.反应缓冲液：使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺（如Tris和甘氨酸）和硫醇化合物的缓冲液。广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）也必须在进行染料缀合之前除去（例如通过透析）。 4.反应温度：大多数缀合在室温下进行。特定标记反应可能需要升高或降低的温度。iFluor系列染料是AF系列染料的**替代品。

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点击查看实验方案

Alexa Fluor 555 iFluor 555琥珀酰SE 货号：1028

  • AAT Bioquest iFluor 染料干货锦集 你想了解的都在这里
  • 锦囊：iFluor 系列染料大集合

产品说明书

染色样本分析

操作步骤

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL，再加入1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去硫柳汞，以获得**标记结果。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得**标记效率，建议*终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B），及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。

3.确定*佳染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定*佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）。

3.6检测上述4种结合物，确定*佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。

4.运行结合反应：

4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。

注意：溶液B /溶液的*佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

图示

Alexa Fluor 555 iFluor 555琥珀酰SE 货号：1028

图1.将HeLa细胞与小鼠抗微管蛋白，然后分别与AAT的iFluorTM 555山羊抗小鼠IgG偶联物（红色，右侧）和山羊抗小鼠IgG与AlexaFluor®555偶联（红色，左侧）一起孵育。 细胞核用Hoechst 33342（Blue，Cat＃17530）染色。

Alexa Fluor 555 iFluor 555琥珀酰SE 货号：1028

图2. HeLa细胞用小鼠抗微管蛋白染色，然后用iFluor TM 555山羊抗小鼠IgG（H + L）（红色）染色；肌动蛋白丝用Phalloidin-iFluor TM 488偶联物（绿色）染色；细胞核用DAPI（蓝色）染色。