Buccutite 过氧化物酶（HRP）抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的*便捷方法。蛋白质 – 蛋白质缀合通常用双功能接头（例如常用的SMCC）进行，在每个末端具有不同的反应性以连接两种不同的蛋白质。

Buccutite 过氧化物酶（HRP）抗体偶联试剂盒 适合标记1mg蛋白

        Buccutite 过氧化物酶（HRP）抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的*便捷方法。蛋白质 – 蛋白质缀合通常用双功能接头（例如常用的SMCC）进行，在每个末端具有不同的反应性以连接两种不同的蛋白质。交联剂的一端（通过NHS酯）与氨基酸赖氨酸和N-末端中发现的胺（-NH2）反应，另一端（通过马来酰亚胺）与氨基酸中发现的硫醇基团（-SH）反应。半胱氨酸。然而，SMCC修饰的蛋白质极不稳定并且通常是自身反应性的，因为蛋白质通常含有胺和硫醇基团，其引起显着量的均聚交联。此外，量化蛋白质上马来酰亚胺基团的数量是相当困难和繁琐的。 Buccutite 过氧化物酶（HRP）抗体偶联试剂盒设计用于直接从蛋白质，肽和含有游离氨基的其他配体制备辣根过氧化物酶（HRP）偶联物。我们的试剂盒中提供的HRP已使用我们专有的接头Buccutite FOL预先激活，可直接用于缀合。 Buccutite FOL活化的HRP在极其温和的中性条件下容易与含有Buccutite MTA的分子反应，无需任何催化剂。与常用的SMCC和其他类似技术相比，我们的Buccutite 生物共轭系统更易于使用。它能够以更高的效率和产量实现生物分子的更快和定量缀合。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Buccutite 过氧化物酶（HRP）抗体偶联试剂盒。 

产品说明书

实验方案

操作步骤

1.运行Antibody-Buccutite MTA反应

1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。

2.准备旋转柱用于抗体-Buccutite MTA纯化

2.1将提供的旋转柱（组分D）反转几次以重新悬浮沉降的凝胶并除去任何气泡。

2.2取下**并将色谱柱放入洗涤管（2 mL，未提供）中。取下盖子，让多余的填料缓冲液通过重力排放到凝胶床的顶部。如果色谱柱没有开始流动，请将盖子推回色谱柱并再次将其取出以开始流动。丢弃排出的缓冲液，然后将色谱柱放回洗涤管中。但是，如果将色谱柱放入12 x 75 mm试管（未提供）中，请立即离心。

2.3在摇动式离心机中以1,000×g离心2分钟（参见“离心注意事项”部分）以除去包装缓冲液。丢弃缓冲液。

2.4向柱中加入1-2 mL 1X PBS（pH 7.2-7.4）。每次施用PBS后，让缓冲液通过重力排出，或将柱离心2分钟以除去缓冲液。丢弃收集管中的缓冲液。重复此过程3-4次。

2.5在摇动式离心机中以1,000×g离心2分钟（参见“离心注意事项”部分）以除去包装缓冲液。丢弃缓冲液。

3.纯化抗体-Buccutite MTA溶液

3.1将柱（来自步骤准备旋转柱用于抗体-Buccutite MTA纯化）置于干净的收集管（1.5mL，未提供）中。 小心地将样品（~105μL，来自Step Antibody-Buccutite MTA反应）直接加载到色谱柱中心。

3.2加载样品后，加入5μL1XPBS（pH 7.2-7.4），使总体积为110μL。 将柱以1,000xg离心5-6分钟，并收集含有所需抗体-Buccutite MTA溶液的溶液。

4.制备抗体-PE缀合物

4.1通过向Buccutite FOL活化的PE（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

4.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。

4.3抗体-PE结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-PE结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。

5.抗体-PE共轭物的储存

抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM存在下储存并避光时，抗体-PE缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-PE缀合物冻干并在≤-20℃下储存。

6.离心注意事项

6.1旋转柱（组分D）可以装入2mL微量离心管或12×75mm试管中，用于在离心过程中收集样品。 使用2 mL微管和色谱柱进行初始色谱柱平衡步骤。

6.2能够产生1,000 x g的*小力的摆动式离心机适用于Bio-Spin柱。 在特定转速下产生的重力是微量离心机转子半径的函数。 有关从每分钟转数（RPM）到离心力或g力的转换信息，请参阅摆动式离心机说明手册。 或者，使用以下等式计算达到1,000 x g重力所需的RPM速度。

6.3RCF（xg）=（1.12 x 10-5）×（RPM）×2×r（RCF是相对离心力，r是从转子中心到Bio-Spin柱中间测量的以厘米为单位的半径 ，RPM是转子的速度）。