活细胞荧光示踪探针CFSE是美国AAT Bioquest生产的检测样品中存活细胞的试剂。细胞的荧光标记是确定总细胞数或样品中存在多少活细胞的有效方法。流式细胞仪结合荧光染色是分析异种细胞群体的有力工具。荧光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物是扩散到细胞中的非荧光分子，并被细胞内非特异性酯酶水解产生荧光产物，荧光产物只能积聚在具有完整细胞膜的细胞中，因此，带有渗漏膜的死细胞不会被染色。FDA及其类似物（如CDCFDA）的膜运输和细胞内水解的**动力学与细胞功能有关，因此FDA标记可用于通过流式细胞术或荧光显微镜监测细胞，FDA染料标记的细胞荧光强度在细胞系和菌株之间有很大差异，这可能是由于细胞内酯酶活性的差异所致。CFSE是一种具有胺反应性的FDA衍生物，已广泛用于通过流式细胞仪监测细胞增殖。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供*上等的活细胞荧光示踪探针。

产品说明书

样品方案分析

概述

用测试化合物制备细胞

添加0.5到5μMCFSE配制工作溶液

在室温或37℃下将染料与细胞一起孵育10到30分钟

去除染料工作溶液

使用Ex / Em = 490/520 nm（FL1通道）的流式细胞仪进行分析

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。 它仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

操作步骤

1.准备10 mM DMSO储备溶液

对于＃22022：将5.6mg溶于1ml DMSO中以制备10mM储备溶液（1mg / ml相当于1.8mM）;对于＃22028，向每个小瓶中加入90μLDMSO以制备10mM储备溶液。

注意：请及时使用原液并且将任何剩余的溶液等分储存，并在<-20℃冷冻。避免反复冻融循环，避免光照。

2.准备CFSE工作溶液

使用之前，用Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或其他缓冲液（pH7）稀释步骤1中的DMSO储备液（20,000至2,000次），准备CFSE工作溶液（0.5至5μM）并离心。

3.用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：

3.1用测试化合物细胞培养一段时间。

3.2离心细胞，每管取1-5×10⁵个细胞。

3.3在500μL染料工作溶液中重悬细胞（来自步骤2）。

3.4在室温或37°C下用染料溶液孵育细胞10到30分钟，避光。

3.5从细胞中取出染料工作溶液，用HHBS或其他缓冲液清洗细胞。将细胞重悬于500μL预热的HHBS或培养基中，得到每管1-5×10⁵个细胞。

3.6用流式细胞仪（FL1通道）或荧光显微镜观察Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光变化。