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- 产品名称:过氧化酶检测试剂盒 近红外荧光
- 产品货号:11553
- 产品品牌:AAT Bioquest
简单介绍
本试剂盒经过优化处理,并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供上等的Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒。
产品描述
Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 近红外荧光
货号 | 11553 | 存储条件 | f/l |
规格 | 500 Tests | 价格 | |
Ex (nm) | 646 | Em (nm) | 667 |
分子量 | 溶剂 | ||
产品详细介绍 |
Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒,过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小,因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比,过氧化酶也更便宜;其主要缺点是在保护剂存在的条件下溶解性低;而在低浓度下,过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA(酶联**吸附实验)、**组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的**个检测试剂。Amplite荧光法过氧化酶检测试剂盒 *近红外荧光* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析检测方案。本试剂盒使用Amplite IR,HRP近红外荧光底物。Amplite IR是过氧化酶的显色底物,它比H2O2和过氧化酶,及其它的过氧化酶的显色底物(例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue)具有更高的灵敏度。Amplite IR可产生在647 nm具有*大吸收光,在670 nM处具有*大激发光的底物,这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小,在600nm处几乎没有光吸收。本试剂盒可以用于ELISAs,酶促反应动力学分析,氧化酶抑制剂高通量筛选等。本试剂盒经过优化处理,并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供上等的Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒。
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产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备过氧化物酶工作溶液(50μL)
2.添加HRP标准品和/或测试样品(50μL)
3.在室温下孵育30-60分钟
4.监测Ex / Em = 640/680 nm处的荧光强度(截止= 665 nm)
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Amplite IR过氧化物酶底物储备液(100X):
将250μLDMSO(组分E)加入到Amplite IR过氧化物酶底物(组分A)的小瓶中以制备100X Amplite IR过氧化物酶底物储备溶液。
1.2 HRP标准溶液(20 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分C)加入到辣根过氧化物酶(组分D)的小瓶中以制备20U / mL HRP标准溶液。
1.3 H2O2储备溶液(20 mM):
将22.7μL的3%H2O2(0.88M,组分B)加入977μL的测定缓冲液(组分C)中以制备20mM H2O2储备溶液。 注意:稀释的H2O2溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。
2.标准溶液
HRP标准
将15μL20U / mL HRP标准溶液加入985μL测定缓冲液(组分C)中,得到300 mU / mL HRP标准溶液(SD7)。 取300 mU / mL HRP标准溶液(SD7),进行1:3连续稀释,得到连续稀释的HRP标准品(SD6 – SD1)和分析缓冲液(组分C)。
3.工作溶液
将50μL的100X Amplite IR过氧化物酶底物储备溶液和50μL的20mM H2O2储备溶液加入到4.9mL的测定缓冲液(组分C)中以制备过氧化物酶工作溶液,避光。
样品分析
表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品(SD1-SD7,0.41至300mU / mL),BL =空白对照,TS =测试样品。
BL | BL | TS | TS |
SD1 | SD1 | … | … |
SD2 | SD2 | … | … |
SD3 | SD3 | ||
SD4 | SD4 | ||
SD5 | SD5 | ||
SD6 | SD6 | ||
SD7 | SD7 |
表2.每个孔的试剂组成
孔 | 容积 | 试剂 |
SD1-SD7 | 50ul | 连续稀释液(0.41至300 mU / mL) |
BL | 50ul | 分析缓冲液(组分C) |
TS | 50ul | 测试样本 |
1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品(SD),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。
2.向HRP标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL过氧化物酶工作溶液,使总过氧化物酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μL过氧化物酶工作溶液,总体积为50μL/孔。
3.在室温下孵育反应30至60分钟,避光。
4.用荧光板读数器在激发= 600-650nm,发射= 650-690nm(*佳Ex / Em = 640 / 680nm,截止= 665nm)监测荧光增加。 注意:也可将板的内容物转移到白色透明底板上,并用吸光度酶标仪在647±5nm波长下读数。 与荧光读数相比,吸收检测具有较低的灵敏度