pNPP 货号:11619-AAT Bioquest荧光染料

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  • 产品名称: pNPP
  • 产品货号:11619
  • 产品品牌:AAT Bioquest

简单介绍

pNPP 是美国AAT Bioquest生产的荧光素,该产品在与磷酸酶相互作用后,无色和非荧光FDP被水解成高荧光荧光素,其表现出优异的光谱特性,与配备有氩激光激发的大多数荧光仪器的*佳检测相匹配

产品描述

 pNPP

pNPP   货号:11619

货号 11619 存储条件                f/l
规格                        25 mg                      价格              
Ex (nm) 399 Em (nm)
分子量 263.05 溶剂 Water
产品详细介绍

        pNPP 是美国AAT Bioquest生产的荧光素,该产品在与磷酸酶相互作用后,无色和非荧光FDP被水解成高荧光荧光素,其表现出优异的光谱特性,与配备有氩激光激发的大多数荧光仪器的*佳检测相匹配。或者,FDP也可用于检测发色模式中的磷酸酶,因为酶产物(荧光素)表现出很大的消光系数(接近100,000cm-1mol-1)。在一些文献中,FDP被认为是*敏感的荧光磷酸酶底物之一。FDP已广泛用于各种ELISA测定。此外,它还用于检测酪氨酸磷酸酶。FDP是热不稳定的,需要特别注意保存固体样品和储备溶液。

        Mup是用于磷酸酶的荧光底物。它广泛用于检测溶液中的磷酸酶。然而,这种磷酸酶底物不适合活细胞或连续测定,因为MU(4-甲基伞形酮)是酶产物,其仅在pH值> 10时发展出*大荧光。因此,也难以使用MUP检测具有酸性*佳pH范围的磷酸酶,例如酸性磷酸酶。

        AAT Bioquest提供的CF-MUP Plus,用于解决与MUP基质相关的pH限制问题。CF-MU在pH 5.0以上表现出*大荧光,因此CF-MUP底物可以很好地用于连续磷酸酶测定。它还可以用于酸性pH的测定,例如酸性磷酸酶和一些蛋白磷酸酶。

        衍生自红色荧光二甲基吖啶酮(Sun Red)的磷酸酶底物仅含有单个水解敏感部分,从而避免了基于荧光素底物的双相动力学。磷酸酶催化的SRP的水解产生可以用633nm激光激发并且发射~660nm的太阳红荧光团。虽然Sun Red很容易在633 nm处激发,红色发射约为660 nm,但SRP在633 nm处的吸收非常小,没有红色发射,使SRP成为*敏感的NIR磷酸酶传感器之一。请不要使用DMSO制备储备溶液,因为它会显著增加分析背景。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供上等的pNPP。 

产品说明书

磷酸盐底物的测定方案

概述

在Tris缓冲液(50μL)中制备10-50μM磷酸盐

添加磷酸酶标准品和/或测试样品(50μL)

在室温或37℃孵育30至120分钟监测荧光强度

注意:以下是溶液中磷酸酶测定的推荐方案。 该说明仅提供指导,应根据具体需要进行修改。

1.准备工作解决方案:

1.1在升值溶剂中制备2至10 mM的储备溶液(见说明书中的表)。任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃冷冻。

注意1:不要使用DMSO,ETOH或METH制备SunRed™磷酸盐(目录号11629)的原液,因为它可以显著提高分析背景。

注意2:避免反复冻融循环,避免光照。

1.2制备2X磷酸盐工作溶液:在实验当天,将底物溶解在升值溶剂中或在室温下解冻等份的储备溶液(来自步骤1.1)。在100 mM Tris缓冲液或您选择的缓冲液(pH 8至9)(非磷酸盐缓冲液)中制备10至50μM的2X工作溶液。

 

2.在上清液中进行磷酸酶测定:

2.1将50μL2X磷酸盐工作溶液(来自步骤1.2)加入磷酸酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使总磷酸酶测定体积为100μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μL2X磷酸盐工作溶液。

2.2在所需温度下孵育反应30至120分钟,避光。

2.3用荧光板读数器检测适当滤光片组(见说明书中的表)的荧光增加。

2.4空白孔中的荧光(仅用测定缓冲液)用作对照,并从具有磷酸酶反应的那些孔的值中减去