钙离子荧光探针Cal-520FF, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，Cal-520®提供强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。Cal-520®AM是一种新型荧光钙敏感染料，与现有的绿色钙指示剂（如Fluo-3 AM和Fluo-4 AM）相比，具有显着改善的信噪比和细胞内保留。表达通过钙信号传导的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Cal-520 AM。一旦进入细胞内，Cal-520 AM的亲脂性阻断基团被酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，留在细胞内。与钙结合后，其荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显著增加了Cal-520®的荧光。Cal-520®AM具有长波长，高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性，是测量细胞钙的理想指示剂。高信噪比和更好的细胞内保留使Cal-520®钙测定成为评估GPCR和钙通道靶标以及筛选其激动剂和拮抗剂的有力工具。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供*上等的钙离子荧光探针。

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产品说明书

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Cal-520FF，AM原液。
2.1Cal-520FF ，AM的用量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Cal-520FF ，AM与439.01μL无水DMSO混合。

3.使用10μMCal-520FF ，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1*终孔内浓度为Cal-520FF ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的*终井内浓度：0.04％
3.3*终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Cal-520FF TM，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Cal-520FF™的*终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度*终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的*终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的*终浓度调节至以下：5μMCal-520FF，AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育60-90分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 492/514 nm运行实验。