T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQ–NEB酶试剂 New England Biolabs

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T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQ                              收藏

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相关产品

通用 miRNA 克隆接头
 

特性

 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 末端
 将腺苷化单链引物连接至小 RNA 上,用于 cDNA 文库构建
 将腺苷化单链引物连接至 RNA 上,用于链特异性 cDNA 文库构建  

概述

 
 T4 RNA 连接酶 2,截短型 KQT4 Rnl2tr KQ能特异性将 末端预腺苷化的 DNA RNA 连接到RNA 3´ OH 末端。反应无需 ATP,但需预腺苷化接头。

T4 Rnl2tr KQ T4 RNA 连接酶 2,截短型(NEB#M0242)的双点突变体。 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性, K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接(串联体和环)。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K,提高了酶的连接活性,使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。
因为不再使用
ATP,而改用预腺苷化接头,同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性,所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中,优化了接头的连接过程。

 

来源

重组 E. coli 菌株,携带有 MBP 融合表达的质粒,该质粒克隆有含编码 T4 RNA 连接酶 2 的前249 个氨基酸序列。 T4 Rnl2tr K227Q 是将 227 位的赖氨酸突变为谷氨酸。 T4 Rnl2tr KQ 分别在 55 位置进行了突变,精氨酸突变为赖氨酸、赖氨酸突变为谷氨酰胺。

 

 

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,1 mM DTT],25℃ 温育。
热失活:65℃ 20 分钟。  

随酶提供的试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000  

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。

 

单位定义

200 单位指 10 μl 反应体系中,25℃ 条件下,1 小时能将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头(NEB #S1315)] 所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。  

浓度

200,000 units/ml。  

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com,www.neb.com。  

SplintR® 连接酶–NEB酶试剂 New England Biolabs

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SplintR®  连接酶--NEB酶试剂 New England Biolabs SplintR®  连接酶--NEB酶试剂 New England Biolabs SplintR®  连接酶--NEB酶试剂 New England Biolabs

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特性

 连接被互补 RNA 固定的相邻的单链 DNA
 鉴定 miRNAs 和 mRNAs,包括 SNPs  

概述

SplintR 连接酶也称为 PBCV-1 DNA 连接酶或 Chorella 病毒 DNA 连接酶,它能够高效催化相邻的 DNA 核苷酸的连接,这个连接过程需要一条互补的 RNA 在两条 DNA 单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。这种以前没有报道过的活性可能推动一些创新性 miRNAs 和 mRNAs,包括 SNPs 的分析方法。在二代测序和分子诊断等众多领域中,SplintR 是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性,对 RNA 介导固定的 DNA 底物亲和性强(米氏常数 Km = 1 nM),能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定 RNA。因此,在 RNA 检测技术中,SplintR 连接酶不失为最佳选择用酶。  

来源

来自重组的 E. coli 菌株,其携带编码 PBCV-1 DNA 连接酶的基因。 

反应条件

1X SplintR 连接酶反应缓冲液,25℃ 温育,最佳连接温度是 16℃。热失活:65℃ 温育 20分钟。  

质保声明

SplintR 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

单位定义(粘性末端活性单位)

1 单位指 20 μl 反应体系中,1X SplintR 连接酶反应缓冲液,16℃ 条件下,15 分钟内能使 2 pmol(完成 50%)三重 FAM 标记的 DNA:RNA 杂交底物连接所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

浓度

25,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶特性和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

T3 RNA 聚合酶–NEB酶试剂 New England Biolabs

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相关产品

T7 RNA 聚合酶
SP6 RNA 聚合酶

特性

 制备放射性标记的 RNA 探针
 合成用于体外翻译的 RNA
 合成用于 RNA 结构、加工和催化性能研究的 RNA
 合成 反义 RNA,调控基因表达 

概述

T3、T7 和 SP6 RNA 聚合酶分别对 T3、T7 和 SP6 噬菌体启动子具有高度的特异性。现已开发出多种载体,可将目的基因序列克隆到 T7 和 SP6 启动子下游的多克隆位点中,以克隆的 DNA 为模板体外合成相应的 RNA。用 T7 和 SP6 RNA 聚合酶合成的 RNA 具有 mRNA 的生物特性,可进行准确剪切。实验证实,用靶标 DNA 反向转录所产生的反义 RNA 能特异性阻断体内 mRNA 的翻译。由于RNA/DNA 杂交体比 RNA/RNA 和 DNA/DNA 杂交体更稳定,因此核酸杂交反应中的检测信号会更强。

来源

SP6 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株,该菌株携带克隆于 Salmonella typhimurium LT2Z 的 SP6 RNA 聚合酶基因。 T7 RNA 聚合酶来自重组 E.coli BL21 菌株,该菌株携带含可诱导的 lac UV5 启动子及其控制的 T7 基因 I 的 pAR1219 载体。T3 RNA 聚合酶来自重组 E.coli 菌株,该菌株携带可表达T3 基因载体。

反应条件

1X RNAPol 反应缓冲液 [40 mM Tris-HClpH 7.9),6 mM MgCl22 mM 亚精胺,1 mM DTT]。反应时需加入各 0.5 mM 的 ATP、UTP、GTP、CTP(不随酶提供)和带有启动子的模板 DNA,在 37 ℃ 温育。

质保声明

无 RNA 聚合酶、DNase 和 RNase 污染。 

单位定义

1 单位指在 37℃ 条件下, 1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。

浓度

T3 RNA 聚合酶:50,000 units/ml;T7 RNA 聚合酶:50,000 units/ml;SP6 RNA 聚合酶:20,000 units/ml。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com,www.neb.com。