镍离子快速纯化柱—Capturem™ 膜技术酶试剂盒Takara Clontech

发表于2023年11月8日由Amresco中国

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

镍离子快速纯化柱—Capturem^™ 膜技术
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635710	Capturem^™ His-Tagged Purification Miniprep Kit	20 Purifications	￥2,545 ￥2,036
Clontech	635713	Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Kit	6 Purifications	￥3,316 ￥2,653
Clontech	635715	Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns	25 Columns	￥7,311
Clontech	635719	Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns	50 Columns	￥13,160
Clontech	635714	Capturem^™ His-Tagged Purification 96	96 well	￥4,691 ￥3,753
Clontech	635724	Capturem^™ His-Tag Large Volume	4 Purifications	￥5,462 ￥4,370
Clontech	635730	Capturem^™ His-Tagged Purification 24-Well Plate	24 well	￥4,888 ￥3,910

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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■ 产品简介

Capturem^™ His-Tagged Purification Kit是以镍离子为配基，结合Capturem^™ 新型膜技术开发的用于His标签蛋白质快速分离纯化的产品。与传统的固定化金属离子树脂相比，Capturem^™ 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造，增加了膜孔表面积，对His标签蛋白质的结合能力≥75 mg/cm³。产品最突出的特点是柱床体积小，可在室温下操作，纯化简单快速，比传统树脂的应用范围更加灵活广泛。有小量（miniprep）、中量（maxiprep）、大量（large volume）以及高通量（24 well和96 well）五种规格可供选择。

■ 产品特点

· 室温下操作，可应用于哺乳动物细胞和细菌样品
· 操作简单快速，蛋白质小量纯化5 min即可完成，大量纯化也仅需15-30 min
· 操作时间短，有利于蛋白质样品保持活性
· 柱床体积小、带入污染少，与传统的镍离子树脂相比，产物纯度更高
· 一次性使用纯化柱，避免样品之间交叉污染
· 除了部分产品中提供的xTractor Buffer以外，还兼容其他的裂解buffer，通用性强
· 兼容多种添加剂（如β-ME、EDTA、DTT、甘油、TCEP等），可在变性或非变性条件下进行纯化

■ Capturem^™ 膜原理

■ 产品主要参数

*收量多少取决于样品的类型、物种以及抗体同种型（isotype）。

上图A图红色方框部分为Capturem His-Tagged Purification Large Volume Units（白底的瓶顶装置），B图红色方框部分为滤瓶螺纹接头 (可用于33-45 mm直径的瓶口)。图A为纯化装置直接与直径为33 mm的螺纹滤瓶直接连接。图C为纯化装置通过螺纹接头连接了45 mm的滤瓶。图D为纯化装置与50 ml的tube直接连接。

上图为使用Capturem^™ His-Tagged Purification Large Volume Unit从细菌裂解液中纯化过表达的6×His-GFPuv的演示示例。图A.将纯化装置与直径为33 mm的螺纹滤瓶直接连接。图B.将含有目的蛋白质的澄清裂解液上样。图C.膜在上样和洗涤操作后结合了目的蛋白质，因此呈现出绿色荧光蛋白（GFP）特征性的黄绿色，在洗脱操作之后恢复为初始的白色。图D.目的蛋白质6×His-GFPuv被洗脱进50 ml的收集tube中。

■ 操作流程

■ 实验例

实验例1

Capturem纯化柱对不同浓度的多种类添加试剂有良好的兼容性。上图为使用miniprep kit对不同种类不同浓度添加剂的检测结果，操作按照产品说明书进行。每项实验的样品、平衡液、洗涤液及洗脱液中均有所要检测的添加试剂，样品最终进行两次300 μl的洗脱操作。

兼容试剂一览表

Reagent	Compatibility*
MOPS	200 mM
HEPES	200 mM
Tris	200 mM
EDTA	10 mM
Beta-mercaptoethanol	30 mM
DTT	10 mM
TCEP	5 mM
Guanidine-HCl	6 M
Urea	8 M
Nonionic detergent (Triton X-100)	2%
Nonionic detergent (Tween 20)	2%
Anionic detergent (SDS)	1%
Arginine	500 mM
Glycine	100 mM
Histidine	20 mM
Sodium chloride	2 M
Imidazole	40 mM
Glycerol	10%

* 表中数据为本产品经测试能够兼容的试剂的最高浓度。

实验例2

Capturem纯化柱在变性条件下纯化效果良好。使用miniprep kit按照产品说明书进行操作。根据变性和非变性条件添加适当的buffer，每个纯化柱上样均为800 μl表达6×his-GFPuv的细胞裂解上清液，样品中按需要添加8 M尿素或6 M盐酸胍。

实验例3

Capturem纯化柱纯化哺乳动物细胞表达的6×His标签蛋白质。图A和B，将编码6×his-tagged MAPK1或 6×his-tagged ADRB2的质粒转染293T细胞进行培养。细胞裂解后取澄清的上清液上样，然后用400 μl wash buffer洗涤，再使用300 μl elution buffer洗脱。将各步骤组分通过4-20%的聚丙烯凝胶电泳检测，并做硝酸纤维素膜印记检测。图A左图，丽春红染色显示不同组分中的所有蛋白质。图A右图，用MAPK1特异性抗体做免疫印迹实验可检测到对应条带。图B左图，丽春红染色显示不同组分中的所有蛋白质。图B右图，用ADRB2特异性抗体做免疫印迹实验可检测到产物中富集的ADRB2。图C，使用编码DsRed-Express2和6×his-tagged Metridia luciferase的双顺反子质粒转染293T细胞，在10 cm的培养皿中培养。取细胞培养上清液用maxiprep柱纯化，6 ml wash buffer洗涤，1 ml elution buffer洗脱。所有离心操作的参数为2,000×g离心5 min，最后通过Ready-to-Glow^™ 对各组分中的荧光素酶的活性进行分析。

■ 各种试剂盒组成

· Capturem^™ His-Tagged Purification Miniprep Kit （635710）

Capturem His-Tagged Purification Miniprep Column	20 个
xTractor Buffer	15 ml × 2
Wash Buffer	10 ml
Elution Buffer	10 ml

· Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Kit （635713）

Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column	6 个
Capturem Maxiprep Filters	6 个
xTractor Buffer	200 ml
Wash Buffer	40 ml
Elution Buffer	15 ml

· Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns（635715）*

Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column

25 个

· Capturem^™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns（635719）*

Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column

50 个

· Capturem^™ His-Tagged Purification 96（635714）*

Capturem His-Tagged Purification 96-Well Plate

1 块

· Capturem^™ His-Tagged Purification Large Volume（635724）*

Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit	4 个（每个盒子中2个）
Bottle Thread Adaptor	1 个

· Capturem^™ His-Tagged Purification 24-Well Plate（635730）*

Capturem His-Tagged Purification 24-Well Plate

1 块

*注：Capturem^™ His-Tagged Purification 24-well、96-well、Maxiprep Columns以及Large Volume中不含buffer，请使用以下组分的buffer：

缓冲液	组成
Lysis Buffer	推荐使用xTractor Buffer（Code No. 635625），也可使用其他标准的裂解buffer
Wash Buffer	150 mM NaCl,20 mM Na3PO4,pH7.6
Elution Buffer	500 mM NaCl,20 mM Na3PO4,500 mM imidazole, pH7.6

参考文献

[1] Stephanie S. Pavlovich, Sean P. Lovett,Galina Koroleva, et al. The Egyptian Rousette Genome Reveals Unexpected Features of Bat Antiviral Immunity[J]. Cell, 2018, 173(5):1098–1100.
[2] Sandra Luz Martínez-Hernández, Daniel Cervantes-García, Martín Munoz-Ortega, et al. An anti-amoebic vaccine: generation of the recombinant antigen LC3 from Entamoeba histolytica linked to mutated exotoxin A (PEDIII) via the Pichia pastoris system[J]. Biotechnology Letters, 2017, 39 (8):1149-1157.
[3] Min Kong, Fengjuan Wang, Liuying Tian, et al. Functional identification of glutamate cysteine ligase and glutathione synthetase in the marine yeast Rhodosporidium diobovatum[J]. Science of Nature, 2018, 105 (1-2):4.
[4] Ariana Kariminejada, Mohammadreza Barzgarb, Bita Bozorgmehra, et al. Novel mutations and a severe neurological phenotype in Sjogren-Larsson syndrome patients from Iran[J]. European Journal of Medical Genetics, 2018, 61 (3):139.
[5] Naho Mugita, Takayuki Nambu, Kazuya Takahashi, et al. Proteases, actinidin, papain and trypsin reduce oral biofilm on the tongue in elderly subjects and in vitro[J]. Archives of Oral Biology, 2017, 82:233-240.
[6] Xiao-Xiao Cheng, Li-Hong Zhao, Steven J.Klosterman, et al. The endochitinase VDECH from Verticillium dahliae inhibits spore germination and activates plant defense responses[J]. Plant Science, 2017, 259:12.

实验操作视频：

https://www.takarabio.com/learning-centers/protein-research/his-tag-purification/protocols/video-capturem-his-miniprep

更多产品信息请点击：

页面更新：2020-03-20 11:07:38

Capturem™ Trypsin （质谱级）酶试剂盒Takara Clontech

发表于2023年11月8日由Amresco中国

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

Capturem^™ Trypsin （质谱级）
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635737	Capturem^™ Trypsin 96-Well Plate (Mass Spectrometry Grade)	1 × 96-Well Plate	￥6,030
Clontech	635736	Capturem^™ Trypsin 96-Well Plate (Mass Spectrometry Grade)	4 × 96-Well Plates	￥21,610
Clontech	635739	Capturem^™ Trypsin Activation Buffer	50 ml	￥629
Clontech	635740	Capturem^™ Trypsin Miniprep Kit (Mass Spectrometry Grade)	20 Rxns	￥3,213

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■ 产品简介

Capturem^™ Trypsin能在室温下快速、高效并且完整的酶解消化蛋白质用于质谱分析，与需要4小时甚至过夜的传统蛋白质酶解消化操作流程相比，可以使蛋白质组学分析流程更加连贯、流畅。本制品基于新型Capturem^™ 膜技术，膜上固定trypsin（猪胰腺来源，且经过还原甲基化修饰，稳定性和抗自溶能力都显著增强），有小型离心柱以及96孔板的形式可供选择，能在短短几分钟内完成独立或高通量样品的蛋白质酶解消化，不需要溶液法的长时间孵育（长时间孵育易造成蛋白质的氧化或非特异性修饰，最终导致鉴定困难并且重复性低），并且自溶片段很少，效率更高。此外，使用小离心柱或plate的方法操作速度快，更能避免溶液法易出现的过度酶解消化的情况。每个小离心柱或96 well plate的单孔最大上样量为80 μg的蛋白质或25 μg的抗体。

■ 产品特点

·操作快速，步骤简单，Miniprep产品4 min内即可在室温下酶解蛋白质样品，无需过夜处理
·比溶液法效率更高，酶解更彻底，且不易出现过度酶解
·Trypsin经过修饰稳定性更高，样品中自溶片段更少，蛋白质非特异性修饰几率更低
·可以使整个蛋白质组学分析流程更加连贯，实现更有效的肽和蛋白质的质谱鉴定
·有独立的小型离心柱和高通量的96 well plate形式可供选择，满足不同的实验需求

* 4 × 96-Well Plates包装的产品不包含Activation Buffer，需要搭配购买635739或自行配制，每个plate需要搭配使用25 ml Activation Buffer

■ 操作流程

Capturem^™ Trypsin消化流程。 在用活化buffer激活Capturem^™ Trypsin后，将天然状态或经变性处理的样品溶液（50-800 μl）加入孔中，通过2 min的离心使样品过柱。在柱上进行胰蛋白酶消化，随后肽片段再次进行2 min的离心洗脱。与传统溶液法需要过夜消化的时长相比，Capturem^™ Trypsin进行完全的抗体消化仅需3-6 min。*本流程不包括变性/还原/烷基化的时间。

■ 产品应用

·蛋白质鉴定
·蛋白质组学分析
·质谱样品制备
·抗体鉴定

■ 实验例

在天然条件下用Capturem^™ Trypsin消化80 μg的肌红蛋白（Apo）的HPLC图谱。由图可见，Capturem^™ Trypsin酶解消化的产物具有很高的重复性。

对使用Capturem^™ Trypsin消化的SILuLite进行定量。Trypsin离心法消化SILuLite可产生ng级别（1, 10, 50 ng）的可检测替代肽段。特异性肽段的AUCs具有线性相关性。

产品详情请点击：

页面更新：2020-04-22 09:18:32

Capturem™ Trypsin酶试剂盒Takara Clontech

发表于2023年11月8日由Amresco中国

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

Capturem^™ Trypsin
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	635722	Capturem Trypsin	20 rxns	￥3,060

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Capturem – Amresco官网

■ 产品简介

蛋白质质谱分析前的样品消化步骤，通常需要4个小时甚至过夜，如果使用Capturem^™ Trypsin 或 Capturem^™ Pepsin，可在室温下快速，高效和完全的消化蛋白质，从而使蛋白质组学分析流程更加连贯。这两款产品是一次性小型离心柱的形式，应用新型膜技术，膜上固定有胰蛋白酶（Trypsin）或胃蛋白酶（Pepsin），在短短几分钟内即可高效、完全地酶解蛋白质样品，与传统的溶液法过夜处理相比，时间更短、效率更高、重复性更好、胰蛋白酶自溶片段更少，避免发生过度消化。

■ 快速、简单的操作流程

Capturem^™ Trypsin 和 Capturem^™ Pepsin包含小型离心柱和活化buffer，操作流程简单、快速，只需要加入200 μl活化buffer离心1 min，然后加入蛋白质样品再离心1 min，即可洗脱获得可用于下游分析的肽段。

■ 产品特点

·操作快速，2 min-3 min内即可酶解蛋白质样品，无需过夜处理
·比溶液法效率更高，酶解更彻底
·样品中自溶片段更少，蛋白质非特异性修饰几率更低
·可以使整个蛋白质组学分析流程更加连贯，实现更有效的肽和蛋白质的质谱鉴定

■ 应用

·蛋白质鉴定
·蛋白质组学分析
·质谱样品制备
·抗体鉴定

■ 实验例

使用Capturem^™ Trypsin对BT474全细胞裂解液进行酶解消化并做蛋白质组学分析。通过RP-HPLC将裂解液分成19个独立的组分（图A），然后再使用CapturemTrypsin对每个组分单独酶解，并使用LC/MS-MS分析，每个组分中带有2个或以上的特异性肽段的蛋白质总数被鉴定并绘制出，如B图所示。

使用Capturem^™ Trypsin可以实现快速完全的Apomyoglobin（Apo）酶解。上图为使用RP-HPLC分析CapturemTrypsin和常规溶液法酶解蛋白质的结果，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用CapturemTrypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用CapturemTrypsin酶解的非常彻底。

使用Capturem^™ Trypsin可以酶解紧密折叠的蛋白质Myoglobin (Myo)。使用RP-HPLC对Capturem Trypsin和常规溶液法酶解的产物进行分析，图A为未酶解的完整蛋白质，图B为溶液法室温酶解16 h的蛋白质，图C为使用CapturemTrypsin酶解1 min的蛋白质，结果显示使用CapturemTrypsin可以快速有效地酶解紧密折叠的蛋白质。

Capturem^™ Pepsin的操作流程。在酶消化之前，抗体样品被变性和还原。使用附带的活化buffer初次活化柱子后，将还原处理后的抗体样品溶液（50-800 μl）加入离心柱中，离心1分钟。在这个过程中，柱上发生胃蛋白酶消化，随后再一次离心洗脱即可获得肽片段，加入NaOH中和洗脱的肽片段，即可用于下游分析。

使用Capturem^™ Pepsin消化不同的小鼠抗体同种型。小鼠的IgG1, IgG2a, IgG2b, 和 IgG3各取
100 μg，使用TCEP和醋酸于75℃处理15 min进行变性操作，然后用5%甲酸buffer稀释。使用Capturem^™ Pepsin对稀释的样品进行消化，通过SDS-PAGE对消化和未消化的样品（各取4 μg）进行检测，如上图所示。

不同批次的Capturem^™ Pepsin消化产物HPLC图谱比较。使用5%的甲酸稀释50 μg的Apo，选择3个不同批次的Capturem^™ Pepsin对其进行消化，HPLC结果显示三组消化产物具有相同的片段，说明Capturem^™ Pepsin具有良好的重复性。

Capturem^™ Pepsin与pepsin溶液法消化结果比较。对50 μg 的anti-HER2单克隆抗体使用3种方法进行消化，分别是Capturem^™ Pepsin，pepsin溶液法孵育4小时，pepsin溶液法孵育过夜。然后进行质谱分析。由上图可以看出，使用溶液法的消化产物峰左移并且总体峰的数量较多，说明产生了过度消化，而使用Capturem^™ Pepsin则没有这个问题。

产品详情请点击：

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镍离子快速纯化柱—Capturem™ 膜技术酶试剂盒Takara Clontech

Capturem™ Trypsin （质谱级）酶试剂盒Takara Clontech

Capturem™ Trypsin酶试剂盒Takara Clontech

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