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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 ：大肠杆菌
抗 CBD 单克隆抗体 收藏
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相关产品
pTXB1 载体
pTYB21 载体
几丁质树脂
抗 CBD 单克隆抗体
特性
单柱纯化且无需使用蛋白酶
目的蛋白质不含来自载体的氨基酸
可融合到目的蛋白的 N 端或 C 端
重组蛋白的连接或标记
可分离有或无 N 端甲硫氨酸的蛋白
可分离有或无 N 端甲硫氨酸的蛋白
关于产品详细描述和 pTXB1 和 pTYB21 载体图谱，包括 MCS（多克隆酶切位点），请见目录 355-356 页。载体序列文件请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。
概述
IMPACT（Intein Mediated Purificaiton with an Affinity Chitin-binding Tag）试剂盒利用经改良过的蛋白剪接元件（内含肽）进行一步亲和纯化重组蛋白（图1）。该系统与其它蛋白融合表达系统的主要区别在于：无需蛋白酶作用，即可将重组蛋白与其亲和标签（Tag）分离。
IMPACT 试剂盒能够融合表达含有内含肽及几丁质结合结构域（CBD）的蛋白，融合标签可以融合到目标蛋白的 C 端（pTXB1）或 N 端（pTYB21）（图 2）。在硫醇试剂（如 DTT）的参与下，内含肽进行特异性的自我剪切，释放出目的蛋白。pTXB1 载体还可用于表达和纯化 C 端含硫脂键的蛋白，并用于内含肽介导的蛋白连接（IPL，图 3）。IPL 反应，即表达蛋白连接，可通过一种天然肽键将 N 端为半胱氨酸的多肽或蛋白和一段细菌表达出的 C 端硫脂键蛋白连接起来，此反应可用于蛋白标记或半合成。有关 IMPACT 系统和 IPL 的更多信息请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。
pTYB21 的内含肽标签包含酿酒酵母（Sce）VMA1 内含肽和几丁质结合域融合在目的蛋白的 N 末端。
pTXB1 是大肠杆菌表达载体，携带有一个小的蛋白自剪切元件即来自 Mycobacterium xenopi gyrA 基因的 mini 内含肽［Mxe GyrA 内含肽，22 kDa］。蛋白自剪切元件经修饰后与来自芽孢杆菌（Bacillus circulans）的几丁质结合域（CBD）一起共同形成一个内含肽标签。该标签可与几丁质珠（NEB #S6651）结合。使用硫醇试剂（如 DTT）或 MESNA（2-mercaptoethanesulfonic acid）（后续连接用）诱导内含肽自我剪切并释放出目的蛋白。
图 1：单柱亲和纯化麦芽糖结合蛋白。泳道 1：未诱导细胞提取物。泳道 2：诱导表达融合蛋白细胞提取物。泳道 3：4℃ 过夜诱导裂解得到麦芽糖结合蛋白。泳道 4：麦芽糖结合蛋白偶联到含有 N 端半胱氨酸的肽链上。Marker M：蛋白分子量标准（NEB #P7703）。
图 2：IMPACT 系统流程图
图 3：内含肽介导的蛋白连接（IPL）流程图。
表 1：IMPACT 载体及其应用。
a实际切割效率取决于临近的残基和融合蛋白的折叠。b DTT 仅用于蛋白纯化。MESNA 可以使分离的蛋白拥有一个 C-末端的巯酯键，可用于连接、标记和环化。c 半胱氨酸可用来替代 DTT。
iMPACT 试剂盒组成
– 大肠杆菌表达载体：pTXB1、pTYB21 和 pMXB10 对照载体
– 几丁质珠：纯化融合蛋白的亲和基质（结合容量 = 2 mg/ml）
– 抗 CBD 单克隆抗体
– DTT 与 SDS 上样缓冲液
– DTT 与 SDS 上样缓冲液
参考文献
关于本产品特点与应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。
