荧光法胞内总ROS检测试剂盒 橙色荧光

Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 橙色荧光

活性氧（ROS）是氧正常代谢的天然副产物，在细胞信号传导中起重要作用。 ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管**，糖尿病，骨质疏松症，中风，炎性**，许多神经退行性**和癌症中的作用已得到公认。 ROS测量将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。 Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒使用我们专有的ROS Brite 570指示剂来定量活细胞中的ROS。与ROS反应后，可渗透细胞且无荧光的ROS Brite 570表现出很强的荧光信号。 ROS Brite 570指示剂位于细胞质中。 ROS Brite 570指示剂的荧光信号可以通过荧光显微镜，高通量筛选，荧光酶标仪或流式细胞仪进行检测。 Cell Meter 荧光细胞内总ROS活性测定试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法，可在孵育1小时内检测活细胞中的细胞内ROS（尤其是超氧化物和羟基自由基）。可以使用荧光酶标仪或带有TRITC滤光片的荧光显微镜以方便的96孔或384孔板形式进行检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

（适用于荧光显微镜、荧光酶标仪）

1.在生长培养基中准备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS

3.添加ROS Brite 570工作溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）

4.将细胞在37°C下染色30-60分钟

5.在Ex / Em = 540/570 nm（截止= 550 nm）或配备TRITC滤光片的荧光显微镜下检测荧光的增加（底部读取模式）

（流式细胞仪）

1.在生长培养基中准备细胞
2.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
3.将ROS Brite 570与细胞一起孵育30-60分钟
4.使用带有FL2通道的流式细胞仪检测荧光强度

溶液配制

储备溶液配制

1. ROS Brite 570储备溶液（500X）：将40 µL DMSO（组分C）添加到ROS Brite 570（组分A）小瓶中，并充分混合以制成500X ROS Brite 570储备液，避光。 注意：20 µL 500X ROS Brite 570储备溶液足以用于1个板。 对于流式细胞仪，为方便起见，可以将5倍ROS Brite 570储备液稀释5倍至DMSO中的100倍。 为了存放，请将管子紧紧密封。

工作溶液配制

将20 µL的500X ROS Brite 570储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成ROS Brite 570工作溶液。 注意：此ROS Brite 570工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

实验步骤

1.针对荧光显微镜和荧光酶标仪：

1.1在所需的缓冲液（例如PBS或HHBS）中，用10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。

1.2要诱导ROS，请在室温下或在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育细胞板（例如：用100 µM氢过氧化叔丁基（TBHP）处理Hela细胞30分钟）。

1.3将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的ROS Brite 570工作溶液添加到细胞板中。

1.4将细胞在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育30分钟至60分钟。

1.5使用荧光酶标仪（Ext / Em = 540/570 nm（截止= 550nm））检测荧光的增加，或使用带有TRITC滤光片组的荧光显微镜检测细胞。

2.针对流式细胞仪：

2.1准备从5×10⁵到1×10⁶细胞/ mL的密度的细胞。 注意：应根据个体情况评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的*佳细胞密度。

2.2在所需的缓冲液（例如PBS或HHBS）中用测试化合物处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。

2.3要诱导ROS，请在室温下或在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育细胞板至少30分钟（如对于用100 µM氢过氧化叔丁基（TBHP）处理的Hela细胞，则需30分钟） ）。

2.4向细胞培养基中加入1 µL / mL的500X ROS Brite 570储备液细胞或5 µL / mL的100X ROS Brite 570储备液细胞。

2.5将细胞在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育30至60分钟。

2.6使用带有FL2通道的流式细胞仪检测荧光强度。

荧光法胞内总ROS检测试剂盒 适合于流式细胞仪

Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 适合于流式细胞仪

活性氧（ROS）是氧正常代谢的天然副产物，在细胞信号传导中起重要作用。但是，在与氧化应激相关的状态下，ROS水平会急剧增加。 ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管**，糖尿病，骨质疏松症，中风，炎性**，许多神经退行性**和癌症中的作用已得到公认。 ROS检测将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒使用我们独特的Amplite ROS Green荧光定量活细胞中的ROS，Amplite ROS Green具有细胞渗透性。与ROS反应时会生成绿色荧光。 Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法，可在培养一小时后检测活细胞中的细胞内ROS。该试剂盒针对流式细胞仪应用进行了优化，其信号可以通过Ex / Em = 490/520 nm（FL1通道）进行检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备密度为0.5-1×10⁶细胞/ mL的细胞
2.在0.5 mL细胞悬液中加入1 µL 500X Amplite ROS Green
3.在37℃下将细胞染色1小时
4.处理细胞以诱导ROS
5.使用带有FL1通道的流式细胞仪分析细胞（Ex / Em = 490/520 nm）

溶液配制

1.储备溶液配制

        除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。

Amplite ROS绿色储备溶液（500X）：将100 µL DMSO（组分C）添加到Amplite ROS Green（组分A）的小瓶中，并充分混合以制成500X Amplite ROS Green储备液。 避光。 注意：要存放，请密封管。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1.对于每个样品，以0.5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度在0.5 mL测定缓冲液（组分B）或自备缓冲液中制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导ROS的*佳细胞密度。

2.将1 µL 500X Amplite ROS Green储备溶液加入0.5 mL细胞悬液中。

3.在37ºC下孵育1小时。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Amplite ROS Green孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。合适的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物，优化每个实验的孵育时间。

4.通过在所需的缓冲液（例如PBS或HBSS）中添加50 µL 11X测试化合物来处理细胞。对于对照孔（未处的细胞），添加相应量的缓冲液。

5.将细胞在37ºC下孵育，以诱导ROS（避光）。注意：我们在37℃下用100 µM TBHP（氢过氧化叔丁基）处理Jurkat细胞30分钟，以诱导ROS。有关详细信息，请参见图1。

6.使用具有FL1通道（Ex / Em = 490/520 nm）的流式细胞仪检测荧光强度。

荧光法胞内总ROS检测试剂盒 红色荧光

Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 红色荧光

活性氧（ROS）是氧正常代谢的天然副产物，在细胞信号传导中起重要作用。但是，在与氧化应激相关的状态下，ROS水平会急剧增加。 ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管**，糖尿病，骨质疏松症，中风，炎性**，许多神经退行性**和癌症中的作用已得到公认。 ROS测量将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。 Amplite 荧光ROS检测试剂盒使用我们独特的ROS指示剂来定量活细胞中的ROS。 Amplite ROS Red具有细胞渗透性。与ROS反应时会产生红色荧光。该试剂盒是一种优化的“混合和读取”测定形式。 Amplite 荧光ROS测定试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法，可在1-2小时的孵育中检测活细胞中的细胞内ROS。该测定可以以方便的96孔或384孔板形式进行，无需分离步骤即可轻松实现自动化。使用荧光酶标仪或荧光显微镜可以轻松读取其信号。它可用于定量ROS活性或筛选ROS抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 在生长培养基中准备细胞
2. 加入Amplite ROS Red工作溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
3. 在37°C下孵育细胞1小时
4. 用测试化合物处理细胞以诱导ROS
5. 在Ex / Em = 520/605 nm（截止= 590 nm）或安装Ex / Em = 520/605 nm滤光片的荧光显微镜下检测荧光增加（底部读取模式）

溶液配制

储备溶液配制

1. Amplite ROS Red储备液（500X）：将40 µL DMSO（组分C）添加到Amplite ROS Red（组分A）的小瓶中，并充分混合以制成500X Amplite ROS Red储备液。 避光。 注意：20 µL 500X Amplite ROS Red储备液足以用于1个板。 注意：如果将试管紧密密封并避免光照，可以将未使用的部分等分并在<-20°C下保存超过一个月。 避免重复冻融循环。

工作溶液配制

将20 µL 500X Amplite ROS Red储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Amplite ROS Red工作溶液。 注意：此Amplite ROS Red工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Amplite ROS Red工作溶液添加到细胞板中。

2.将细胞在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育一小时。

3.在所需的缓冲液（例如PBS或HHBS）中，用20µL 11X测试化合物（96孔板）或10 µL 6X测试化合物（384孔板）处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。

4.要诱导ROS，请在室温下或在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育细胞板至少15分钟（对于用1 mM H₂O₂处理的Hela细胞为30分钟）。

5.在Ex / Em = 520/605 nm（截止= 590 nm）处使用荧光酶标仪（底部读取模式）检测荧光的增加，或在Ex / Em = 520/605 nm滤光片组（Texas Red）下使用荧光显微镜观察细胞）。