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pMAL™ 蛋白融合表达系统（停产，有替代）–NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 ：大肠杆菌

pMAL™ 蛋白融合表达系统（停产，有替代）                              收藏

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#E8200S
1 set
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停产通知

产品于2020 年 6 月 30 日停产，替代产品为：NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统（E8201）

单独出售的相关产品

Amylose 树脂
#E8021V 10 ml . . . . . . .¥1,179
#E8021S 15 ml . . . . . . .¥1,779
#E8021L 100 ml . . . . . . .¥8,609
 
Xa 因子蛋白酶
#P8010V 25 μg . . . . . . . . ¥379
#P8010S 50 μg . . . . . . . . ¥729
#P8010L 250 μg . . . . . . .¥2,889
 
pMAL-p5X 载体
#N8109S 10 μg . . . . . . .¥1,069
 
pMAL-c5X 载体
#N8108S 10 μg . . . . . . .¥1,069

 

 

特性

 超过 75% 的蛋白可获得高效表达，蛋白产量可达 100 mg/L
 可在细胞质或周质中表达：在周质或SHuffle® 细胞质中表达均可提高二硫键的形成，促进蛋白折叠
 增强可溶性：MBP 融合蛋白增强了蛋白质在大肠杆菌中的可溶性
 采用麦芽糖温和洗脱：无去污剂或变性剂对蛋白活性产生影响 

对于产品详细描述和 pMAL-p5X 载体图谱，包括 MCS（多克隆酶切位点），请见目录 386 页。关于pMAL 载体序列文件，请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。

概述

pMAL 系统是一种高效的蛋白融合表达及纯化系统。pMAL 载体含有编码麦芽糖结合蛋白（maltosebinding protein, MBP）的大肠杆菌 malE 基因，其下游的多克隆位点便于目的基因插入，表达 N 端带有 MBP 的融合蛋白。通过“Ptac”强启动子和 MBP 翻译起始信号使克隆基因获得高效表达，并利用 MBP 对麦芽糖的特异性结合实现融合蛋白的一步亲和纯化（图 1）。

此系统的 pMAL 载体在邻近多克隆位点处含有一段编码特异性蛋白酶识别位点的序列，从而便于纯化后将目的蛋白与 MBP 切割分离，并且目的蛋白不含任何来自载体的氨基酸。为了实现这一目的，多克隆位点中有一限制性内切酶识别位点正好位于特异性蛋白酶识别位点处，同时也是目的基因插入的位点。

pMAL 系列载体可从 1 升的培养液中表达出 100 mg 的融合蛋白。大部分情况下，表达出的融合蛋白是可溶的，因为 MBP 已经被证实可提高大肠杆菌中表达蛋白的可溶性。尽管没有一种表达系统适用于所有克隆基因，但 pMAL 蛋白融合表达和纯化系统经证实：在被检测的已知蛋白中，有超过 75% 能表达出稳定产量。

由于 pMAL-c5X 载体上删除了 malE 信号序列，因此融合蛋白在细胞质中表达。而 pMAL-p5X 载体含有 malE 信号序列，它将引导融合蛋白穿越质膜进入细胞周质。 

pMAL™ 蛋白融合表达系统（停产，有替代）--NEB酶试剂 New England Biolabs
图 1：pMAL 系统流程示意图。

pMAL 蛋白融合表达和纯化系统组成

  – pMAL-c5X, pMAL-p5X
– Amylose 树脂（结合容量 ～6-8 mg/ml 体积）
– Xa 因子蛋白酶
– MBP5（SDS-PAGE 电泳用 marker）
– MBP5-paramyosin-ΔSal
（Xa 因子蛋白酶切割的对照蛋白）
– E. coli ER2523（NEB 表达用感受态细胞）

参考文献

关于本产品特点与应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。 

NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统–NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 ：大肠杆菌

NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统                              收藏

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#E8201S
1 set
8,519.00
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产品特点

该产品可直接替换 NEB #E8200，pMAL™ 蛋白融合表达系统

NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统利用 Ptac 超强启动子和麦芽糖结合蛋白（MBP）的翻译起始信号来增强目标蛋白在大肠杆菌中的溶解度和表达水平。所得产物是 MBP 融合蛋白，后续可通过亲和反应进行纯化。
 

特性

·稳定可靠的大肠杆菌表达系统：蛋白产量高（可达 100 mg/L）
·目标蛋白与 MBP 融合表达可增强其在大肠杆菌中的溶解度（1）
·两步纯化：第一步：直链淀粉洗脱后使用 TEV 蛋白酶切割，第二步：经镍柱填料分离可获得高纯度的无标签的靶蛋白
·使用麦芽糖进行温和洗脱；无需洗涤剂或刺激性变性剂
 

概述

 在 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统中，pMAL-c6T 载体提供了一种将克隆基因或开放阅读框编码的蛋白质表达和纯化的方法。首先，将目标克隆基因插入大肠杆菌编码麦芽糖结合蛋白（MBP）的 malE 基因框架下游；这样构建的载体可表达 MBP 融合蛋白（2,3）。pMAL-c6T 载体表达 N 端标记六组氨酸的 malE 基因（缺少分泌信号序列，并且经改造可以与直链淀粉更紧密地结合），其后是 TEV 蛋白酶识别序列、多克隆酶切位点和三位终止密码子。pMAL-c6T 载体在细胞质中表达 MBP 融合蛋白。这种方法使用“tac”强启动子和 malE 翻译起始信号，从而能够使克隆序列进行高水平表达（4,5）。然后，利用 MBP 与麦芽糖的亲和特性，使用直链淀粉树脂对融合蛋白进行一步纯化（6）。


直链淀粉纯化后，可以使用 TEV 蛋白酶将 MBP 标签从目标蛋白上切下来，目标蛋白不残留任何载体衍生基团。MBP 标签和 TEV 蛋白酶均带有 His 标签，因此可轻松从反应中去除。将上述反应产物经 NEBExpress 镍柱填料（NEB＃S1428）分离，可去除 MBP 标签和 TEV 蛋白酶，从而在收集管液中可获得目标蛋白。目标蛋白产量最高可达 100 mg/L，一般产量为 10–40 mg/L。

图 1：NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统的原理图
NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统--NEB酶试剂 New England Biolabs
图 2：使用 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统进行蛋白表达
NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统--NEB酶试剂 New England Biolabs
亲和纯化的 MBP6-TEV-ParamyosinΔSal 蛋白使用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。泳道 1：蛋白标准品。泳道 2：未处理的细胞。泳道 3：转入目标基因的细胞。泳道 4：使用麦芽糖从直链淀粉柱上洗脱下来的纯化融合蛋白。泳道 5：TEV 蛋白酶切割后的纯化蛋白。泳道 6：NEBExpress 镍柱填料收集管液分离的目标蛋白。
 

试剂盒组分

随产品提供如下试剂

 

名称

储存温度(℃)

浓度

pMAL-c6T DNA

  

200 µg/ml

Amylose Resin

4

  

TEV Protease

-20

10,000 units/ml

TEV Protease Reaction Buffer

-20

10 X

Anti-MBP Monoclonal Antibody

-20

  

MBP6 Protein

-20

40 µg/ml

MBP6-TEV-Paramyosin ΔSal

-20

5 mg/ml

E. coli ER2523 (NEB Express) (Glycerol Stock)

-20

  

储存温度

 -20℃

表达菌株感受态细胞选择图表–NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 ：无细胞表达

表达菌株感受态细胞选择图表                              收藏

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特性

 无动物制品污染
 T1 噬菌体抗性（fhuA2）
 蛋白酶 Lon 和 OmpT 缺陷型 B 菌株
 提供各种方便的剂型
 可根据客户定制包装批量销售 

概述

NEB 提供多种适用于各类蛋白表达的感受态细胞。Shuffle® 菌株在表达含多个二硫键的重组蛋白时，显著提高形成正确二硫键的能力。通过 Lemo21（DE3）可实现 T7 的可调控表达，这种菌株是表达包括膜蛋白在内的问题蛋白的理想选择。NiCo21（DE3）可用于 His 标记蛋白的表达和纯化。NEB 表达系统和 T7 表达系统均可实现对蛋白表达水平的调控。其中有些菌株可以通过 lacIq 调控非T7 质粒的诱导（IPTG）表达。然而只有 NEB 提供通过 lysY 基因对表达进行更为严格调控的菌株。每种表达菌株都提供一份优化的表达方案。

更多信息参见 204-215 页。 

表达菌株

表达菌株感受态细胞选择图表--NEB酶试剂 New England Biolabs

注：感受态细胞应贮存于 -80℃，一旦融化，就不能再被冻存。-20℃ 贮存会显著降低其转化效率。只要温度高于 -80℃，即使未被融化，细胞转化效率也会降低。

* NEB Express 是 pMAL 蛋白融合表达与纯化系统的推荐菌株。