小鼠载脂蛋白E（ApoE）试剂盒*针对ELISAPro自动ELISA处理进行了优化*

Amplite™小鼠载脂蛋白E（ApoE）试剂盒*针对ELISAPro自动ELISA处理进行了优化*

Mabtech的经过仔细验证的ELISAPRO试剂盒提供了所有必需的试剂，以方便，可靠，特异的方式方便地定量测定血清，血浆和细胞培养上清液中的分析物。

ELISA测定原理

ELISAPRO试剂盒随附有预先涂有单克隆抗体（mAb）。样品中的分析物被包被的mAb捕获，并被生物素化的检测mAb和链霉亲和素-HRP（SA-HRP）检测。注：TMB底物的添加将导致底物出现颜色。用硫酸终止反应，并且可以使用ELISA板酶标仪定量光密度。通过与平行分析的ELISA标准品的系列稀释液比较来确定分析物的浓度。

所需材料

1. 酶标仪可在450 nm读取
2. ELISA平板清洗器；自动或手动（例如，多移液管或喷射瓶）、精密移液管，吸头和量筒
3. 用于标准和样品稀释的试管
4. 蒸馏水或去离子水 

**信息

Stop溶液0.18 M H2SO4（<1％）对眼睛和皮肤有刺激性，应小心处理。由于不知道暴露的影响，因此应仔细处理该标准。溶液中的缓冲液和试剂含有防腐剂Kathon CG（0.002％），这是一种潜在的过敏原，可能通过皮肤接触引起过敏。人和动物样品应被视为潜在危险的生物材料。所有材料应按照当地法规进行处理。有关更多信息，请查阅我们网站上的《**数据表》。

制备

在开始测定之前，让板和测定试剂达到室温（TMB底物除外，*好使用冷底物）。
计划板布局，使其一式两份，包括标准曲线，样品和测定背景对照。每孔的体积不应超过100μl。

产品说明书

样品实验方案

储备溶液配制

1.洗涤缓冲液
将50 ml洗涤缓冲液浓缩液添加到950 ml蒸馏水或去离子水中（足以完成1个板的所有洗涤步骤）。如果在20倍浓缩物中形成了晶体，则将其升至室温并轻轻混合以溶解。
2.样品稀释液
通过用蒸馏水或去离子水将样品稀释液浓缩液稀释5倍来准备所需体积的样品稀释液。对于每个板，将30 ml样品稀释液添加到120 ml水中。
3.样品
所有样品均应在样品稀释液中稀释至少2倍。除去可见的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀释，应在样品之前添加缓冲液。高度溶血和高血脂的样品可能会导致定量结果不准确。含有超出分析标准范围的高水平分析物的样品将需要进一步稀释。
4.小鼠血清/血浆稀释指南
根据对BALB / c和C57BL / 6样品的重复分析，我们建议稀释倍数为10,000X。**的移液非常重要，在稀释步骤之间更换吸头，并使用新鲜制成的稀释液。试剂的含量足以重复使用。
5. ELISA标准
通过添加1 ml标准重构缓冲液将ELISA标准液重构为0.5μg/ ml的原液。不要搅拌。让标准液溶解20分钟并彻底混合。标准液应等份保存在-20°C下。避免重复冻融循环。
6.编制标准曲线
如图所示，稀释标准储备溶液以创建标准曲线。指示的数量足以重复。*后一个样品瓶用作测定背景对照，即应省略标准液。在使用30分钟内准备标准曲线。

工作溶液配制
1.检测抗体
使用后15分钟内，将检测抗体在Apo ELISA缓冲液中稀释至1μg/ ml的浓度。对于每个板，在12 ml Apo ELISA缓冲液中稀释24μl检测抗体。
2.链霉亲和素
在使用后的15分钟内，将抗生蛋白链菌素-HRP用抗生蛋白链菌素-HRP稀释剂稀释1000倍。对于每块板，在12 ml的链霉亲和素-HRP稀释液中稀释12μl的链霉亲和素-HRP。
 
操作步骤

1. 添加样品（至少稀释2倍），标准液和测定背景对照（100μl/孔）。敲击板混合。用粘性板盖覆盖板，并在室温下孵育1小时。
2. 如上所述清洗板。
3. 添加检测抗体（100微升/孔）。盖好板并在室温下孵育1小时。
4. 如上所述清洗板。
5. 加入抗生蛋白链菌素-HRP（100μl/孔）。盖好板并在室温下孵育1小时。
6. 如上所述清洗板。
7. 添加TMB底物（100微升/孔）。在避开直射光的室温下孵育15分钟。
8. 向所有孔（100μl/孔）中添加Stop溶液以停止显影。
9. 在15分钟内测量450 nm处的吸光度。

猴载脂蛋白E（ApoE）试剂盒

Amplite™猴载脂蛋白E（ApoE）试剂盒*针对HRP ELISA进行了优化*

用于定量测定血清/血浆样品和细胞培养上清液中的猴载脂蛋白E（apoE）。请注意，洗涤，封闭和孵育缓冲液应包含清洁剂。吐温20，Triton X-100或NP40的使用浓度为0.05-0.5％。在封闭缓冲液和孵育缓冲液中，建议使用0.1％BSA。

血清/血浆样品：分析人血清/血浆样品时，建议使用Apo ELISA缓冲液稀释样品，标准品和检测抗体。该缓冲液可防止可能由于人血浆和血清中常见的嗜异性抗体的干扰而引起的假阳性读数。apoB分析所必需的样品的Triton X处理不会干扰apoE分析。请参见https://www.mabtech.com/knowledge-center/apodilution的稀释指南。避免重复冻融循环。
注意：该试剂盒中未提供Apo ELISA缓冲液。

产品说明书

样品实验方案

储备溶液配制

通过将小瓶4的物质重新溶于含0.5 mM DTT和0.1％BSA的1 ml PBS中来制备apoE标准品，不要搅拌，在室温下放置20分钟。这将产生5μg/ ml的储备溶液，应立即使用或以等分试样的形式储存在-20°C下以备将来使用。我们建议等分试样在初次使用后不要重新冷冻。对于测试，请使用标准范围作为指导来准备原液的稀释液。

操作步骤

1. 通过添加100μl/孔，用mAb HDL 110涂覆高蛋白结合ELISA板，将其在pH 7.4的PBS中稀释至2μg/ ml。在4-8°C下孵育过夜。
2. 用PBS（200μl/孔）洗涤两次。
3. 通过添加200μl/孔的PBS和含有0.1％BSA（孵育缓冲液）的0.05％Tween 20来封闭板。在室温下孵育1小时。
4. 用含有0.05％Tween的PBS洗涤五次。
5. 通过将小瓶4重新溶于含1％BSA的1 ml PBS中来制备apoA1标准品，不要搅拌，在室温下放置15分钟，然后涡旋振荡3s。得到的储备液为4μg/ ml，应立即使用或以等分试样的形式储存在-20°C下，以备将来使用。我们建议等分试样在初次使用后不要重新冷冻。为了进行测试，请使用标准范围作为指导来准备原液的稀释液。
6. 加入100μl/孔的样品或在血清或血浆样品的孵育缓冲液或Apo ELISA缓冲液中稀释的标准液，并在室温下孵育1-2小时。血清/血浆样品的稀释建议可在以下网址找到：https：// www。mabtech.com/knowledge-center/apodilution。
7. 按照步骤4进行清洗。
8. 在孵育缓冲液或Apo ELISA缓冲液中添加100μl/孔的0.5μg/ ml mAb HDL 44-生物素用于血清/血浆样品。在室温下孵育1小时。
9. 按照步骤4进行清洗。
10. 在孵育缓冲液中以100：1 /孔的比例稀释1：1000的链霉亲和素HRP。在室温下孵育1小时。
11. 按照步骤4进行清洗。
12. 加入100μl/孔的适当底物溶液，如TMB。
13.  在适当时间的显影后，在ELISA读数器中测量光密度。 

猴载脂蛋白E（ApoE）试剂盒

Amplite™猴载脂蛋白E（ApoE）试剂盒*针对ALP ELISA进行了优化*

用于定量测定血清/血浆样品和细胞培养上清液中的猴载脂蛋白E（apoE）。请注意，洗涤，封闭和孵育缓冲液应包含清洁剂。吐温20，Triton X-100或NP40的使用浓度为0.05-0.5％。在封闭缓冲液和孵育缓冲液中，建议使用0.1％BSA。

血清/血浆样品：分析人血清/血浆样品时，建议使用Apo ELISA缓冲液稀释样品，标准品和检测抗体。该缓冲液可防止可能由于人血浆和血清中常见的嗜异性抗体的干扰而引起的假阳性读数。apoB分析所必需的样品的Triton X处理不会干扰apoE分析。请参见https://www.mabtech.com/knowledge-center/apodilution的稀释指南。避免重复冻融循环。
注意：该试剂盒中未提供Apo ELISA缓冲液。

产品说明书

样品实验方案

储备溶液配制

通过将小瓶4的物质重新溶于含0.5 mM DTT和0.1％BSA的1 ml PBS中来制备apoE标准品，不要搅拌，在室温下放置20分钟。这将产生5μg/ ml的储备溶液，应立即使用或以等分试样的形式储存在-20°C下以备将来使用。我们建议等分试样在初次使用后不要重新冷冻。对于测试，请使用标准范围作为指导来准备原液的稀释液。

操作步骤

1. 通过添加100μl/孔，用mAb HDL 110涂覆高蛋白结合ELISA板，将其在pH 7.4的PBS中稀释至2μg/ ml。在4-8°C下孵育过夜。
2. 用PBS（200μl/孔）洗涤两次。
3. 通过添加200μl/孔的PBS和含有0.1％BSA（孵育缓冲液）的0.05％Tween 20来封闭板。在室温下孵育1小时。
4. 用含有0.05％Tween的PBS洗涤五次。
5. 通过将小瓶4重新溶于含1％BSA的1 ml PBS中来制备apoA1标准品，不要搅拌，在室温下放置15分钟，然后涡旋振荡3s。得到的储备液为4μg/ ml，应立即使用或以等分试样的形式储存在-20°C下，以备将来使用。我们建议等分试样在初次使用后不要重新冷冻。为了进行测试，请使用标准范围作为指导来准备原液的稀释液。
6. 加入100μl/孔的样品或在血清或血浆样品的孵育缓冲液或Apo ELISA缓冲液中稀释的标准液，并在室温下孵育1-2小时。血清/血浆样品的稀释建议可在以下网址找到：https：// www。mabtech.com/knowledge-center/apodilution。
7. 按照步骤4进行清洗。
8. 在孵育缓冲液或Apo ELISA缓冲液中添加100μl/孔的0.5μg/ ml mAb HDL 44-生物素用于血清/血浆样品。在室温下孵育1小时。
9. 按照步骤4进行清洗。
10. 在孵育缓冲液中以100：1 /孔的比例稀释1：1000的链霉亲和素ALP。在室温下孵育1小时。
11. 按照步骤4进行清洗。
12. 加入100μl/孔的适当底物溶液。
13.  在适当时间的显影后，在ELISA读数器中测量光密度（对于pNPP为405 nm）。