BCECF, AM pH荧光探针BCECF, AM 货号:21202-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品名称:BCECF, AM pH荧光探针BCECF, AM
  • 产品货号:21202
  • 产品品牌:AAT Bioquest

简单介绍

BCECF, AM pH荧光探针BCECF, AM,细胞内PH值在许多细胞生命活动中发挥着重要作用,例如细胞生长,钙离子的调控,胞吞作用,趋化性,细胞粘合和其它细胞活动。BCECF被广泛地用于细胞内pH的测定。BCECF, AM pH荧光探针BCECF, AM很受欢迎。

产品描述

pH荧光探针BCECF, AM

BCECF, AM pH荧光探针BCECF, AM  货号:21202

货号 21202 存储条件 f/l
规格                     1 mg                        价格                                             
Ex (nm) 504 Em (nm) 527
分子量 808.69 溶剂 DMSO
产品详细介绍

        pH荧光探针BCECF, AM是美国AAT Bioquest生产的用于检测pH的荧光探针,细胞内pH在许多细胞事件中起重要的调节作用,包括细胞生长,钙调节,酶活性,受体介导的信号转导,离子转运,胞吞作用,趋化性,细胞粘附和其他细胞过程。近年来,pH敏感性荧光染料已被广泛应用于监测细胞内pH的变化。使用荧光pH指示剂的成像技术还允许研究人员使用其他技术(如微电极)实现更大的空间分辨率和采样密度来研究这些过程。其中,2’,7′-双 – (2-羧乙基)-5-(和-6) – 羧基荧光素(BCECF)是*常用的pH探针,因为它可用于比率监测细胞pH。BCECF AM是BCECF的细胞渗透型。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供上等的pH荧光探针BCECF, AM。

点击查看光谱

点击查看实验方案

产品说明书

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液和10%Pluronic®F-127溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至20 mM BCECF,AM原液。
2.1使用的BCECF,AM的量:1毫克
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg BCECF,AM与618.28μL无水DMSO混合。

3.使用10μMBCECF,AM 3在HHBS中制备2X工作溶液和0.08%Pluronic®F-127。
3.1*终孔内浓度为BCECF,AM:5μM
3.2Pluronic®F-127的*终井内浓度:0.04%
3.3在合适的容器中混合16μLBCECF,AM和25.6μL10%Pluronic F-127。然后,添加HHBS或您的缓冲区
选择直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议*终浓度为BCECF,AM为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127井浓度*终为0.02%至0.04%。

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的*终浓度调节至以下:5μMBCECF,AM,0.04%Pluronic®F-127

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育30-60分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
6.1在合适的容器中加入HHBS或您选择的缓冲液,直至体积为4 mL。

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 503/528 nm运行实验。


AAT-pH荧光探针BCECF, AM 货号:21022-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品名称:AAT-pH荧光探针BCECF, AM
  • 产品货号:21022
  • 产品品牌:AAT Bioquest

简单介绍

AAT-pH荧光探针BCECF, AM,细胞内PH值在许多细胞生命活动中发挥着重要作用,例如细胞生长,钙离子的调控,胞吞作用,趋化性,细胞粘合和其它细胞活动。BCECF被广泛地用于细胞内pH的测定。 AAT-pH荧光探针BCECF, AM很受欢迎。

产品描述

简要概述

钙离子荧光探针Fura-2,AM是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂,钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体(GPCR)的**发现中的优选方法。 我们的Fluo-8®和Rhod-4 系列钙检测试剂是*亮的绿色和红色钙指示剂,而我们的Cal-520®和Cal-590 具有*高的细胞内钙检测信号/背景比,因为它们具有出色的保留 活细胞。 AAT Bioquest以*高质量提供其他钙指标,如Fluo-4,Fluo-3,Fura-2,Indo-1,Rhod-5N和Rhod-2 AM,金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供*上等的钙离子荧光探针。

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器


荧光显微镜  
激发: Fura 2滤波片
发射: Fura 2滤波片
推荐孔板: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 340,380nm
发射: 510nm
cutoff: 475nm
推荐孔板: 黑色透明
读取模式: 底读模式



产品说明书

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。 它们应该用高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

 

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b)在实验当天,将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02%Pluronic®F-127在您选择的缓冲液(如Hanks和Hepes缓冲液)中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系,我们建议钙指示剂的*终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影,建议使用可产生足够信号强度的*小探针浓度。

c)如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可以在细胞培养基中加入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d)在HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如2.5mM丙磺舒,如果适用)中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e)在所需的Ex / Em波长下进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应:

 

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用等式:[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显著。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。