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E.coli JM109 Competent Cells | ||||||
品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格(元) | 说明书 | 数量 |
Takara | 9052 | E.coli JM109 Competent Cells | 100 μl × 10 | ¥300 |
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页面更新:2020-05-22 14:21:58
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E.coli JM109 Competent Cells | ||||||
品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格(元) | 说明书 | 数量 |
Takara | 9052 | E.coli JM109 Competent Cells | 100 μl × 10 | ¥300 |
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E.coli CJ236 Competent Cells | ||||||
品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格(元) | 说明书 | 数量 |
Takara | 9053 | E.coli CJ236 Competent Cells | 100 μl × 10 | ¥502 |
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■ 制品说明 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Takara公司在Hanahan’s method基础上进行了改良,制备出E.coli CJ236 Competent Cells,当1 ng pUC119转化100 μl 细胞时,转化效率可达1×107 cfu/μg。 E. coli CJ236 Competent Cells适用于制备含有dU的ssDNA。通过CJ236转化后富集的ssDNA,可用于Kunkel法进行定点突变。 |
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■ 细胞浓度 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1 – 2×109 Bacteria/ml | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ Genotype | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
E. coli CJ236 : dut1, ung1, thi-1, recA1 / pCJ105 (F’ camr) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
-80℃。 注意:如果不在-80℃下保存,转化效率将会降低。此时,在使用前,请使用附带的pUC119对照质粒来验证细胞的转化效率。不能液氮保存。 |
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■ 转化效率 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
转入1 ng 的pUC119,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 107 cfu/μg pUC119 |
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■ 注意事项 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。 |
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2. 可使用microcentrifuge tubes代替Falcon tubes (CORNING #352059或352057),但效率可能会降低。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时,适当调整反应条件。例如,当使用microcentrifuge tubes时,42℃放置60秒。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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6. 稀释时使用SOC培养基。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
7. 建议在选择培养基中加入 Chloramphenicol (30 μg/ml) 以保证F’ 质粒稳定。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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10. 制备感受态细胞。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
11. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
页面更新:2021-02-09 13:06:27
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E.coli DH5α Competent Cells | ||||||
品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格(元) | 说明书 | 数量 |
Takara | 9057 | E.coli DH5α Competent Cells | 100 μl × 10 | ¥300 |
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■ 制品说明 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良,制备出E.coli DH5α Competent Cells。 E.coli DH5α Competent Cells在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时,利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性),通过蓝白斑方法可以很容易地鉴别重组体菌株。由于菌株无lac lq,故不需要IPTG。因此,当制作基因文库或进行亚克隆时,可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。 X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
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■ 细胞浓度 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1 - 2×109 bacteria/ml | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ Genotype | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
E.coli DH5α : F-, φ 80dlacZ ΔM15, Δ(lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi -1, gyrA96 , relA1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
-80℃。 注意: -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定,转化效率将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。 |
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■ 质量控制 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1. 转化效率 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
转入1 ng 的pUC19,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pUC19 |
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2. β-半乳糖苷酶的α-互补性 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
当使用pUC19 plasmid进行转化时,含有100 μg/ml Ampicillin和60 μg/ml X-Gal的L-agar plate出现蓝色菌落。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
■ 注意事项 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。 |
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2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD company Code: 352059 或 352057,等),但效率可能会降低。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入的高纯度DNA样品不要超过10 ng。否则转化效率会降低。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时,适当调整反应条件。例如,当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时,42℃放置60秒而不是45秒。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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6. 当加入X-Gal时,按照以下操作进行: | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
·将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到 agar培养基中。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
7. DH5α可用于M13mp载体的复制。但由于其不携带F因子,因而不能形成菌斑。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
页面更新:2020-05-22 14:26:31