Helixyte Green 双链DNA荧光定量试剂盒

Helixyte Green 双链DNA荧光定量试剂盒

简要概述

      Helixyte Green 双链DNA荧光定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于DNA定量的试剂盒，Helixyte 绿色dsDNA定量测定试剂盒可用于在ssDNA，RNA和游离核苷酸存在的情况下选择性地检测低至25 pg / ml的dsDNA。 Helixyte Green与dsDNA结合后显示出较大的荧光增强。 该测定法在三个数量级上是线性的，并且几乎没有序列依赖性，使您能够准确地测量来自多种来源的DNA，包括基因组DNA，病毒DNA，微量制备DNA或PCR扩增产物。 Helixyte 绿色dsDNA定量分析试剂盒比紫外吸收读数的灵敏度高几个数量级。 在等摩尔量的RNA存在下，它对dsDNA具有特异性。 该套件具有混合和读取格式的强大功能。 它可以与台式荧光计或手持式荧光计（例如Qubit荧光计）一起使用。 该试剂盒是Quant-iT PicoGreen®dsDNA分析试剂盒（Quant-iT 和PicoGreen®是Invitrogen的商标）的替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Helixyte Green 双链DNA荧光定量试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

向每个比色皿中添加1mL dsDNA标准液或测试样品
加入1mL Helixyte Green 工作溶液
在室温下孵育5-10分钟
监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1分析缓冲液（1X）
用无菌，蒸馏，无DNase的水将浓缩的缓冲液稀释20倍，从而制备1X检测缓冲液。

2.标准溶液

dsDNA标准
对于高范围标准曲线：
将30 µL 100 µg / mL dsDNA储备溶液（组分C）添加到1.47 mL的1X分析缓冲液中以得到2000 ng / mL dsDNA溶液，然后进行1：2和1:10连续稀释以获得1000、100、10 ，1和0 ng / mL。

对于低范围标准曲线：
将40 µL 2 µg / mL dsDNA储备液添加到1.56 mL 1X分析缓冲液中，以得到50 ng / mL dsDNA溶液，然后以1：2和1:10连续稀释以获得25、2.5、0.25、0.025和0 ng / mL。

3.工作溶液

通过在1X分析缓冲液中将浓缩的DMSO溶液稀释200倍来制备Helixyte Green 工作溶液。 例如，要准备足够的工作溶液以测定2 mL*终体积中的10个样品，请将50μLHelixyte Green （组分A）添加到10 mL分析缓冲液（组分B）中。 通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。 注意：我们建议在塑料容器中而不是玻璃中制备此溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为了获得*佳结果，该溶液应在准备后的几个小时内使用。

样品示例及操作

1.向每个装有1 mL dsDNA标准品，空白对照和测试样品的比色皿中加入1 mL Helixyte Green 工作溶液，以使dsDNA测定总体积为2 mL /比色皿。

2.在避光条件下，于室温下孵育反应5至10分钟。

3.使用分光光度计在Ex / Em = 490/525 nm处监视荧光的增加。 注意：为使光漂白效应*小化，请对所有样品保持恒定的荧光测量时间。

Helixyte Green 双链DNA定量试剂

Helixyte Green 双链DNA定量试剂

简要概述

        Helixyte Green dsDNA染料是美国AAT Bioquest生产的一种超灵敏荧光核酸染料，用于定量溶液中的双链DNA（dsDNA）。*近，Helixyte Green dsDNA染料用于PCR产物的直接循环测序方法中的PCR扩增产量。使用标准光谱荧光计和2.5 ng / mL带有荧光酶标仪的dsDNA检测到少至25 pg / mL的dsDNA（在2 mL测定体积中50 pg dsDNA），在ssDNA，RNA和ss存在下检测效果*小 游离核苷酸。该测定在三个数量级上是线性的并且几乎没有序列依赖性。它是从多种来源准确测量DNA的理想选择，包括基因组DNA，病毒DNA，小量制备DNA或PCR。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Helixyte Green 双链DNA定量试剂。 

产品说明书

分析方案

以下方案是使用Helixyte Green 定量dsDNA的实例。 在打开样品瓶之前，让Helixyte Green 温热至室温。

注意：没有数据可用于解决Helixyte Green dsDNA染色的致突变性或毒性。 因为这种试剂与核酸结合，所以应将其作为潜在的诱变剂进行处理，并进行适当的处理。 应特别小心处理DMSO储备溶液，因为已知DMSO有助于有机分子进入组织。

1.准备Helixyte Green 工作解决方案：

1.1通过在TE（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 7.5-8.0）中浓缩DMSO溶液200倍稀释，制备Helixyte Green的水性工作溶液。 例如，将50μLHelixyteGreen添加至10 mL TE，以制备足够的工作溶液，以在200μL终体积中测定100个样品。通过用铝箔覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。

注1：我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备，因为染料可能会吸附到玻璃表面。

注2：为获得*佳结果，该溶液应在制备后几小时内使用。

2.准备dsDNA标准品的连续稀释液（0至3 ng / mL）：

2.1在ddH2O中制备1mg / mL的dsDNA原液（如来自Sigma的小牛胸腺DNA）。

2.2将10μL1mg / mL dsDNA原液（步骤2.1）加入到998 L TE缓冲液中，得到10μg/ mL dsDNA溶液，然后进行1:10和1：2连续稀释，得到1000,100,50,25 ，12.5,6.25,3.125和0 ng / mL。

2.3如说明书中的表1和2中所述，将dsDNA标准品和含有测试样品的DNA添加到96孔固体黑色微孔板中。

3.运行dsDNA测定：

3.1将100μLdsDNA测定混合物（来自步骤1.1）添加至dsDNA标准品的每个孔，空白对照和测试样品（参见步骤2.3）以使总dsDNA测定体积为200μL/孔。

注1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLdsDNA测定混合物。

注2：对于基于曲线的测定，每曲线添加1mL样品和1mL dsDNA测定混合物。

3.2在室温下孵育反应5至10分钟，避光。

3.3使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm处截止）观察荧光增加。

3.4空白孔中的荧光（仅含TE缓冲液）用作对照，并从具有dsDNA反应的那些孔的值中减去。 从DNA标准曲线中产生的标准曲线确定样品的DNA浓度。