上海金畔生物科技代理销售乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒 Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST,欢迎访问官网了解更多产品信息。
(在高对照孔中, 终止反应
在加Working Solution
前先加Lysis Buffer)
-高对照和低对照的O.D.值之差>0.2;
-在线性曲线上的该细胞浓度的O.D.值<2.0。
6)在高对照孔中加入20 μl Lysis Buffer。
7)在37℃ CO2 培养箱中培养30 min。
8)96孔板离心2 min(250×g)。
9)从每个孔中吸取100 μl 上清液至新的96 孔板中。*为了避免吸出细胞,请小心吸取上清液。
10)在每孔中加入100 μl Working Solution。采用包裹铝箔等方法避光,在室温反应30 min。
11)在每孔中加入50 μl Stop Solution。
12)用酶标仪测定490 nm 的吸光度。
-高对照和低对照的O.D.值之差>0.2;
-在线性曲线上的该细胞浓度的O.D.值<2.0。
*用贴壁细胞时,接种细胞至96孔板过夜预培养,换成新的100 μl 培养基后,进行操作步骤2)。
2)加入100 μl 含有药物的培养基(表2)。
3)在37℃ CO2培养箱内培养合适的时间。
4)在高对照孔中加入20 μl Lysis Buffer 后,在37℃ CO2培养箱内培养30 min。
5)96孔板离心2 min(250×g)。
6)从每个孔中吸取上清液100 μl 至新的96孔板中。*为了避免吸出细胞,请小心吸取上清液。
7)在每个孔中加入100 μl Working Solution 后,在避光、室温的条件下培养30 min。
8)在每个孔中加入50 μl Stop Solution。
细胞损伤率(%) = [(A-C)/(B-C)] ×100
A :样品的吸光度 (样品孔- 样品Blank孔)
B :高对照的吸光度 (高对照孔- 高对照Blank孔)
C :低对照的吸光度 (低对照孔- 背景Blank孔)
药物:丝裂霉素C
细胞:HeLa细胞
培养基:MEM, 10% FBS
培养:37℃ ,5% CO2, 48 h