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PE-Annexin V细胞凋亡检测试剂 货号：22838-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品名称：PE-Annexin V细胞凋亡检测试剂
  • 产品货号：22838
  • 产品品牌：AAT Bioquest

简单介绍

PE-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒 适合于流式细胞仪

产品描述

Cell Meter PE-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒 适合于流式细胞仪

PE-Annexin V细胞凋亡检测试剂 货号：22838

货号 22838 存储条件 r/l                         
规格                         100 Tests                   价格                           
Ex (nm) 564 Em (nm) 574
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

        Cell Meter  PE-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞凋亡的试剂盒，膜联蛋白V可以与包括PE的荧光染料结合。该染料保留了其对磷脂酰丝氨酸（PS）的高亲和力，因此可用作流式细胞术分析正在经历细胞凋亡的细胞的敏感探针。由于PS的外化发生在细胞凋亡的早期阶段，PE膜联蛋白V染色可以比基于核变化（例如DNA片段化）的测定更早地鉴定细胞凋亡。 PE膜联蛋白V染色先于膜完整性的丧失，膜完整性伴随由凋亡或坏死过程导致的新细胞死亡阶段。因此，用PE膜联蛋白V染色通常与碘化丙啶（PI）或7-AAD等活体染料结合使用，使研究者能够鉴别早期凋亡细胞（7-AAD阴性，PE膜联蛋白V阳性）。具有完整膜的存活细胞排除7-AAD，而死亡和受损细胞的膜可透过7-AAD。例如，被认为存活的细胞既是PE膜联蛋白V也是7-AAD阴性的，而处于早期凋亡的细胞是PE膜联蛋白V阳性和7-AAD阴性，而处于晚期凋亡或已经死亡的细胞都是PE膜联蛋白V和7-AAD阳性。该测定法不区分经历凋亡性死亡的细胞与因坏死性通路而死亡的细胞，因为在任一情况下，死亡细胞都将用PE膜联蛋白V和7-AAD染色。然而，当随着时间测量细胞凋亡时，可以经常从PE膜联蛋白V和7-AAD阴性（可行的，或不可测量的细胞凋亡）追踪细胞至PE膜联蛋白V阳性和7-AAD阴性（早期凋亡，膜完整性存在），*后是PE膜联蛋白V和7-AAD阳性（末期凋亡和死亡）。细胞通过这三个阶段的运动表明细胞凋亡。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供上等的Cell Meter  PE-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒。 

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（200μL/样品）制备细胞
2.添加RPE-膜联蛋白V测定溶液
3.在室温下孵育20-60分钟
4.使用FL2通道（Ex / Em = 488/585 nm）用流式细胞仪分析细胞

储备溶液配制

        除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. RPE-Annexin V原液（100X）：
将含有0.2％BSA的200μLPBS加入到RPE-膜联蛋白V（组分A）的小瓶中以制备100X RPE-膜联蛋白V储备溶液。 注意：将重构的100X RPE-Annexin V储备溶液储存在4°C。有关细胞样品制备的指南，点击查看。

操作步骤

1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。注意：膜粘附细胞的膜联蛋白V流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。

2.离心细胞，得到1-5×105个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液（组分B）中。

4.向细胞中加入2μL100XRPE-膜联蛋白V原液。

5.可选：为坏死细胞添加2μL100XNuclear Red DCS（成分C）。

6.在室温下孵育20至60分钟，避光。

7.可选：在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加200至300μL的测定缓冲液（组分B）以增加体积。

8.使用具有FL2通道的流式细胞仪（Ex / Em = 488 / 585nm）监测RPE-膜联蛋白V的荧光强度。当将Nuclear Red DCS添加到细胞中时，使用FL4通道测量细胞活力。

数据分析

        在活的非凋亡细胞中，RPE-膜联蛋白V检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。 在凋亡细胞中，RPE-膜联蛋白V与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外叶上，因此导致染色强度增加。

PE-Annexin V细胞凋亡检测试剂 货号：22838

图1.使用Cell Meter RPE-膜联蛋白V结合细胞凋亡检测试剂盒检测RPE-膜联蛋白V对Jurkat细胞中磷脂酰丝氨酸的结合活性。 将Jurkat细胞在37℃，5％CO2培养箱中在没有（蓝色）或1μM星形孢菌素（红色）的情况下处理4-5小时，然后用RPE-膜联蛋白V染色30分钟。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson）流式细胞仪使用FL2通道测量RPE-膜联蛋白V的荧光强度。

PE-Cy7 标记25ug抗体 货号：1342-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品名称：PE-Cy7 标记25ug抗体
  • 产品货号：1342
  • 产品品牌：AAT Bioquest

简单介绍

Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的*便捷方法。PE-Cy7是流式细胞术中常用的颜色。其主要吸收峰位于565nm，发射峰位于~780nm

产品描述

抗体标记试剂盒 Buccutite PE-Cy7 标记25ug抗体

PE-Cy7 标记25ug抗体 货号：1342

货号                   1342 存储条件             r/l
规格 2 Labelings             价格                 
Ex (nm) 566 Em (nm) 778
分子量 溶剂
产品详细介绍

        Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的*便捷方法。PE-Cy7是流式细胞术中常用的颜色。其主要吸收峰位于565nm，发射峰位于~780nm。 AAT Bioquest提供这种Buccutite 快速标记试剂盒，以促进PE-Cy7串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。 Buccutite PE-Cy7共轭试剂盒为您的抗体与PE结合提供了一种强大而方便的方法。该试剂盒包括预活化的PE和反应缓冲液。整个过程仅需要两次简单的混合，无需进一步纯化。缀合的抗体可用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2次标记反应，每次反应*多25μg抗体。考虑到PE的大尺寸（240kDa），标记反应中使用的抗体量必须始终小于PE的量。任何新抗体试剂的*佳比例必须通过实验确定，但每50μgPE使用25μgIgG抗体通常可获得*佳结果。我们的试剂盒提供预活化的PE-Cy7，以促进PE-Cy7串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。我们的预活化PE-Cy7串联已准备好结合，产生比常规繁琐的基于SMCC的缀合化学高得多的产率。此外，我们的预活化PE-Cy7串联通过其蛋白质丰富的氨基与蛋白质缀合，而SMCC化学靶向必须通过抗体还原而再生的硫醇基团。Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

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产品说明书

实验方案

操作步骤

1.运行Antibody-Buccutite MTA反应

1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。

2.准备旋转柱用于抗体-Buccutite MTA纯化

2.1将提供的旋转柱（组分D）反转几次以重新悬浮沉降的凝胶并除去任何气泡。

2.2取下**并将色谱柱放入洗涤管（2 mL，未提供）中。取下盖子，让多余的填料缓冲液通过重力排放到凝胶床的顶部。如果色谱柱没有开始流动，请将盖子推回色谱柱并再次将其取出以开始流动。丢弃排出的缓冲液，然后将色谱柱放回洗涤管中。但是，如果将色谱柱放入12 x 75 mm试管（未提供）中，请立即离心。

2.3在摇动式离心机中以1,000×g离心2分钟（参见“离心注意事项”部分）以除去包装缓冲液。丢弃缓冲液。

2.4向柱中加入1-2 mL 1X PBS（pH 7.2-7.4）。每次施用PBS后，让缓冲液通过重力排出，或将柱离心2分钟以除去缓冲液。丢弃收集管中的缓冲液。重复此过程3-4次。

2.5在摇动式离心机中以1,000×g离心2分钟（参见“离心注意事项”部分）以除去包装缓冲液。丢弃缓冲液。

3.纯化抗体-Buccutite MTA溶液

3.1将柱（来自步骤准备旋转柱用于抗体-Buccutite MTA纯化）置于干净的收集管（1.5mL，未提供）中。 小心地将样品（~105μL，来自Step Antibody-Buccutite MTA反应）直接加载到色谱柱中心。

3.2加载样品后，加入5μL1XPBS（pH 7.2-7.4），使总体积为110μL。 将柱以1,000xg离心5-6分钟，并收集含有所需抗体-Buccutite MTA溶液的溶液。

4.制备抗体-PE缀合物

4.1通过向Buccutite FOL活化的PE（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

4.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。

4.3抗体-PE结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-PE结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。

5.抗体-PE共轭物的储存

抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-PE缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-PE缀合物冻干并在≤-20℃下储存。

6.离心注意事项

6.1旋转柱（组分D）可以装入2mL微量离心管或12×75mm试管中，用于在离心过程中收集样品。 使用2 mL微管和色谱柱进行初始色谱柱平衡步骤。

6.2能够产生1,000 x g的*小力的摆动式离心机适用于Bio-Spin柱。 在特定转速下产生的重力是微量离心机转子半径的函数。 有关从每分钟转数（RPM）到离心力或g力的转换信息，请参阅摆动式离心机说明手册。 或者，使用以下等式计算达到1,000 x g重力所需的RPM速度。

6.3RCF（xg）=（1.12 x 10-5）×（RPM）×2×r（RCF是相对离心力，r是从转子中心到Bio-Spin柱中间测量的以厘米为单位的半径 ，RPM是转子的速度）。

ReadiUse™预活化PE-iFluor™660串联染料 货号：2579-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品名称：ReadiUse™预活化PE-iFluor™660串联染料
  • 产品货号：2579
  • 产品品牌：AAT Bioquest

简单介绍

预活化PE-iFluor™660串联染料

产品描述

ReadiUse™预活化PE-iFluor™660串联染料

ReadiUse™预活化PE-iFluor™660串联染料 货号：2579

货号 2579                   存储条件                 r/l
规格                       1 mg 价格         
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂 Water
产品详细介绍

R-藻红蛋白（PE）是从红藻中分离出来的。它的主要吸收峰在565 nm，次要峰在496和545 nm。我们的PE-iFluor™660串联染料是一种出色的新颜色，由于其独特的光谱特性而已被验证用于光谱流式细胞仪应用。ReadiUse™预活化的PE-iFluor™660 串联染料是一种活化的PE蛋白，与常规PE相比，可以很容易地偶联到抗体上，具有更高的结合产率。它为制备PE-iFluor™660串联标记的抗体结合物提供了方便的工具，该结合物可用光谱流式细胞仪检测。

产品说明书

染色样本分析

操作步骤

使用Buccutite™MTA制备预活化的抗体

  1. 在DMSO中以约10 mg / mL的浓度重建Buccutite™MTA。
    注意：将未使用的MTA存放在-20°C；它*多可用于两个冷冻和解冻循环。
  2. 在pH = 8.5-9.0缓冲液中以1 mg / ml以上的浓度制备目标抗体（Ab）。
  3. 将MTA以8-10 µg MTA / 100 µg Ab的比例添加到Ab溶液中。
  4. 充分混合并在室温下反应60分钟，在反应过程中旋转。
  5. 用脱盐柱纯化反应混合物，以除去任何未反应的MTA。将缓冲液更换为PBS或您选择的其他缓冲液。
  6. 收集MTA活化的抗体。通过原始起始量的70％产率估算浓度。 

与预活化的PE-iFluor™660串联在一起

  1. 将预活化的PE-iFluor™660串联溶液以100 µL ddH2O的浓度重新配制至10 mg / mL。
    注意：重建的预活化PE-iFluor™660 Tandem不稳定，不能保存超过一个月。
  2. 以300µg PE-iFluor™660 Tandem / 100 µg MTA活化的Ab的比例直接将预激活的PE-iFluor™660 串联染料添加到MTA活化的目标Ab溶液中。
  3. 在室温下将混合物旋转1-2小时。
  4. Ab / PE–iFluor™660串联缀合物现已准备就绪。
    注意：Ab / PE-iFluor™660串联可在4°C下保存两个月。
  5. 可选：Ab / PE-iFluor™660串联可通过尺寸排阻色谱法进一步纯化以获得更好的性能。 

图示

ReadiUse™预活化PE-iFluor™660串联染料 货号：2579

图1.我们预活化的PE-iFluor™660串联染料已通过我们的Buccutite™FOL（提供）进行了预改性。您的抗体（或其他蛋白质）已通过我们的Buccutite™MTA（作为免费样品提供）进行了修饰，以提供经MTA修饰的蛋白质（例如抗体）。MTA修饰的蛋白质易于与FOL修饰的PE-iFluor™660串联抗体（提供）反应，以比SMCC化学方法高得多的产率得到所需的PE-iFluor™660串联抗体结合物。此外，我们的预活化PE-iFluor™660串联反应与MTA改性的生物聚合物反应的浓度远低于SMCC化学反应。