日度归档：2023年10月22日

HiScribe™ SP6 RNA 合成试剂盒–NEB酶试剂 New England Biolabs

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特性

 合成长链或短链 RNA 转录产物

 掺入经修饰的核苷酸
 掺入经标记的核苷酸
 利用帽类似物合成带帽 RNA
 合成高比活或低比活放射性标记的探针

概述：

HiScribe SP6 RNA 合成试剂盒利用 SP6 RNA 聚合酶进行 RNA 体外转录。该试剂盒适用于高效合成 RNA 转录子，并可引入帽类似物（试剂盒中不包含）或经修饰的核苷酸（试剂盒中不包含）以获得带帽、生物素标记或染料标记的 RNA。试剂盒同样适用于合成高比活的放射性 RNA 作为探针或靶标。

利用该试剂盒得到的 RNA 适用于多种下游应用，如RNA 结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析或凝胶迁移滞后实验用探针、印迹杂交、反义 RNA 及 RNAi 实验、微阵列分析、显微注射和体外翻译等。
 
对于 25 μl 反应体系，试剂盒有足够 50 次反应使用的试剂量。使用 1 μg SP6 对照模板 DNA，一次标准反应 RNA 产量 ≥ 80 μg。每个试剂盒可生成 ≥ 4 mg 的 RNA。

HiScribe SP6 RNA 合成试剂盒组分：

 – SP6 反应缓冲液（10X）

– ATP（Tris）、GTP（Tris）、UTP（Tris）、
   CTP（Tris），（50 mM）
– SP6 对照模板
– SP6 RNA 聚合酶混合液
– DNase I（无 RNase）
– LiCl 溶液

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A +1 位点甲基化帽结构类似物
m7G（5´ ）ppp（5´ ）A
#S1405S 1 μmol . . . . . . .¥1,899
#S1405L 5 μmol . . . . . . .¥7,589

自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析酶试剂盒Takara

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自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 640200 ICELL8® cx TCR Chip 1 Chip 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
Clontech 640179 SMARTer® ICELL8® Human TCR a/b Profiling – Indexing Primer Set 1 Chip 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
Clontech 640180 SMARTer® ICELL8® Human TCR a/b Profiling – Indexing Primer Set 5 Chips 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
Clontech 640181 SMARTer® ICELL8® Human TCR a/b Profiling – Indexing Primer Set 10 Chips 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
Clontech 640182 SMARTer® ICELL8® Human TCR a/b Profiling Reagent Kit Each 询价 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析 自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
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高通量地阐明单细胞中T细胞受体Alpha-Beta链多样性
· 灵敏性更高：基于RACE技术保证低丰度TCR变体的检出
· 特异性更强：获得全长reads，目的reads占比高，更正确的配对信息
· 5’端捕获测序差异表达分析：通过比对5’末端信息，产生所有转录本差异表达数据
· 灵活、高通量的单细胞分析：单次实验同时分析8个样品，生成上千单细胞的测序数据
 
■ 应用领域
· 人单细胞TCR库分析（TCRα和TCRβ克隆型）
· 5’端差异表达分析
 
■ 产品说明
Takara Bio高通量TCR免疫组库解决方案应用SMART技术(Switching Mechanism at 5’End of RNA Template)和基于5’RACE的方法，用于捕获由ICELL8 cx Single-Cell System（Code No. 640188）分选得到的上千“活的单细胞”的TCR转录本完整V(D)J可变区域。产生的文库可同时提供α链和β链的多样性信息。
实验流程中，cDNA扩增阶段整合了Illumina特异的接头序列，产生的文库带有index接头，可直接用于Illumina平台测序。Takara Bio高通量TCR免疫组库解决方案也可以同时支持5’末端差异表达分析。
在ICELL8 cx单细胞分选系统上，与单个T细胞一起被分注到TCR芯片（Code No. 640200）上的还有阳性对照和阴性对照。每个TCR芯片含有5,184个纳升级微孔，预制了1,728种Barcode，每个Barcode在芯片上被预制3次。使用CellSelect软件鉴定出具有“活的单细胞”微孔后，SMART RT-PCR试剂将被分注到含“活单细胞”的微孔中，用于后续分析。连接了Barcode序列的cDNA继续在微孔芯片上完成PCR扩增。接下来，从芯片中将连接好Barcode序列的扩增产物集中收集，并进行纯化。纯化后的cDNA作为第一轮TCR特异性PCR的模板，而第一轮TCR特异性PCR的产物作为第二轮TCR特异性PCR的模板，并整合Illumina index序列引物。
 
■ 产品组分
完整的工作流程需要下列Takara Bio产品。请参考User Manual得到一份完整的试剂耗材清单：
用于ICELL8 cx Single-Cell System
· ICELL8 cx TCR Chip (Code No. 640200)
· ICELL8 Human TCR a/b Profiling Reagent Kit (Code No. 640182)
· ICELL8 Human TCR a/b Profiling Indexing Primer Set (Code No. 640179, 640180, 640181)*
· ICELL8 Collection Kit-L (Code No. 640212)
· ICELL8 cx Loading Kit (Code No. 640197)
User Manual：ICELL8® cx Human TCR a/b Profiling user Manual
*NOTE：Code No. 640179包含的Primer量足够1张芯片使用，若实验中需要使用多张芯片，请购买合适的indexing primer set。640180适用于5张芯片的实验，640181适用于10张芯片的实验。
 
自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
图1 ICELL8 Human TCR a/b Profiling技术原理流程图
 
自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
图2 ICELL8 Human TCR a/b Profiling实验流程图
 
使用ICELL8单细胞分选系统对T细胞和PBMCs样品进行单细胞分选及后续单细胞TCR克隆型分析（图3）和5’端差异表达分析（图4）。
自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
图3. T细胞与PBMCs的克隆型read计数 使用Excel对MiXCR软件输出结果进行筛选，为大于阴性对照（1X PBS）的TCRa和TCRb克隆类型定义一个read阈值（绿色实线为阈值线，对应read计数值为8）。数据使用统计软件JMP进行分析，并将结果绘制成箱图。图中点代表一个细胞中的TCRa（蓝色）和TCRb（红色）克隆型。阴性对照用于阈值设定，以便对分析样品和NTC（或低read克隆型）进行区分。Negative control 15个，Positive control 15个，T cells 530个，PBMCs 590个。
 
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自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
图4. T细胞与PBMCs的5’端差异表达分析 使用与图3相同来源的cDNA进行单细胞5’端差异表文库构建，评估每个Barcode获得的reads数。箱图中每个点代表一个指定细胞中检测到的reads数。文库测序由NextSeq® 550测序平台完成，每个细胞产生平均30K reads。在PBMCs和T细胞中平均检测到～1,150个基因。Negative control 15个，Positive control 15个，T cells 530个，PBMCs 590个。
 
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■ 参考文献
Litjens, Nicolle H. R., et al. Validation of a combined transcriptome and T cell receptor Alpha/Beta (TRA/TRB) repertoire assay at the single cell level for paucicellular samples. Front. Immunol., 11, (2020)
 
 
产品详情请点击：自动化高通量的单细胞人T细胞受体分析
 
视频资料:《ICELL8系统T细胞受体测序（TCR-Seq）解决方案》
 

页面更新：2021-02-02 13:32:33

HiScribe™ T7 mRNA 合成试剂盒（含 CleanCap® Reagent AG）–NEB酶试剂 New England Biolabs

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HiScribe™ T7 mRNA 合成试剂盒（含 CleanCap® Reagent AG）                              收藏

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产品特点

·使用 1 µg 对照模板，单次反应可转录高达 90 µg Cap-1 mRNA

·独立包装的 NTP 适用于全部/部分修饰 NTPs 替换
·试剂盒包含模板去除和 RNA 纯化试剂
·试剂盒包含线性对照模板，用于验证 CleanCap® Reagent AG 的 RNA 合成效果

产品概述

 对于大多数真核生物来说，mRNA 需要 5’端带有 7-甲基鸟苷（m7G）帽结构，3’端带有 poly（A）尾才能有效翻译。HiScribe™ T7 mRNA合成试剂盒（含 CleanCap® Reagent AG）优化了 RNA 合成配方，利用三核苷酸帽结构类似物技术，通过一步共转录加帽即可获得带有天然的 Cap-1 结构的 mRNA，且不会影响 RNA 产量。使用含 T7 启动子序列、AG 起始的目标序列和 poly（A）尾编码序列的 DNA 模板，即可转录带有 5’-m7G Cap-1 和 poly（A）尾的 mRNA，该 mRNA 能够有效翻译并能逃避细胞先天免疫反应。

 
HiScribe™ T7 mRNA合成试剂盒（含 CleanCap® Reagent AG）包含独立包装的 NTP 和 CleanCap Reagent AG，适用于全部/部分修饰 NTPs 替换，试剂盒总产量为 1.8 mg mRNA。使用该试剂盒合成的 Cap-1 mRNA 适用于多种应用，包括：转染、显微注射、体外翻译、临床前 mRNA 治疗研究以及 RNA 结构和功能分析。
 
该试剂盒可完成 20 次共转录反应（20 μl 体系）。使用 1 μg CLuc AG 对照模板 DNA 进行标准反应，可转录≥90 μg RNA。每个试剂盒的产量≥1.8 mg RNA。
 
图 1：CleanCap Reagent AG 分子结构
 
HiScribe™ T7 mRNA 合成试剂盒（含 CleanCap® Reagent AG）--NEB酶试剂 New England Biolabs
图 2：使用 CleanCap Reagent AG 时，启动子和起始序列示意图
 
HiScribe™ T7 mRNA 合成试剂盒（含 CleanCap® Reagent AG）--NEB酶试剂 New England Biolabs
 

图 3：CleanCap Reagent AG 比 ARCA 的mRNA 合成产量更高

HiScribe™ T7 mRNA 合成试剂盒（含 CleanCap® Reagent AG）--NEB酶试剂 New England Biolabs

所有反应均使用 5 mM CTP、5 mM UTP 和 6 mM ATP 进行。标准 IVT 反应使用 5 mM GTP，不添加帽结构类似物。ARCA 反应使用 4：1 的 ARCA：GTP（4 mM：1 mM）。含 CleanCap Reagent AG 的 IVT 反应使用 5 mM GTP 和 4 mM CleanCap Reagent AG，反应体系分别参照以下说明书配制：标准 mRNA 合成和 HiScribe T7 mRNA合成试剂盒（含 CleanCap Reagent AG））。反应在 37℃ 下孵育 2 小时，通过 NanoDrop 检测纯度和定量。