天恩泽包涵体蛋白溶解及复性套装 100302-100，产品简介;
产品品牌：天恩泽
产品名称：包涵体蛋白溶解及复性套装
英文名称：Inclusion Body Solubilization and Refolding Kit
产品货号：100302-100
产品规格：100次
产品价格：1490元

天恩泽包涵体蛋白溶解及复性套装 100302-100

我们上海金畔公司作为天恩泽公司的代理商，先简单介绍一下天恩泽公司：

北京天恩泽公司的目标是研发出技术先进、质量稳定、价格合理的试剂精品。公司的创立宗旨是技术至上、质量至上、服务至上，公司的产品研发团队均为高学历并在海外有长期的科研经验；公司的管理团队已在行业内拥有超过20年管理经验；同样，公司的运营团队也有丰富的执行经验。

北京天恩泽公司充分了解客户的需求，并努力创新以满足客户不断发展的需求。我们将与我们的客户共同成长，成为生物技术领域中zhuoyue产品和服务的jijia提供者。

DNAout、RNAout、Erasol、天净沙、克必隆、归去来、好亦多均为天恩泽基因注册商标(试剂类)。

天恩泽包涵体蛋白溶解及复性套装

天恩泽包涵体蛋白溶解及复性套装 100302-100，产品简介;

产品品牌：天恩泽

产品名称：包涵体蛋白溶解及复性套装

英文名称：Inclusion Body Solubilization and Refolding Kit

产品货号：100302-100

产品规格：100次

产品价格：1490元

运输：常温

保存：常温

有效期：1年

货期：1-2天

产品介绍：

包涵体蛋白溶解及复性套装，提供10种条件供优化

天恩泽包涵体蛋白溶解及复性套装 100302-100，产品特点：;

E . c o li 作为宿主表达得到的重组蛋白往往会形成包涵体，其中的重组蛋白 质只完成部分折叠，还没形成后的正确空间结构，所以没有生物活性，要得到有 活性的重组蛋白，还需要后续的溶解和复性（重折叠）处理。目前jichangyong的溶解包 涵体的方法是用尿素，Sarkosyl，盐酸胍等强变性剂，其缺点是包涵体中的重组蛋 白质被*变性，使后续的蛋白质复性处理效率降低。由于包涵体中的重组蛋白质 已经完成了部分折叠，因此本公司基于此事实设计出了此款温和溶解-复性试剂盒， 它具有下列特点：

1. 一站式，提供包涵体洗涤、溶解和蛋白质复性的所有试剂。

2. 采用温和法溶解包涵体，释放的包涵体蛋白质不*变性，还能保持其部分折 叠的结构，使后续的复性处理效率提高。

3. 所用复性液基于稀释复性，经过精心优化，有利于大部分蛋白的复性。

4. 还提供五种不同的添加剂，它们可以单独加入复性液，也可以按一定比例进行 自由组合，以适应不同的蛋白质折叠需求。

5. 本试剂盒提供实惠的小规格，用于做预实验用，用户如果选择到合适的溶液组 合后，可以单独购买其中任何一个温和溶液以用于大量制备。

6. 本试剂盒足够100次小规模（1mL规模）的蛋白质复性实验。

天恩泽包涵体蛋白溶解及复性套装

运输及保存：常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂：去离子水、BCA蛋白浓度测定试剂盒、0.22 um注射器式滤膜

使用方法：

一、洗涤包涵体：用常规方法得到的包涵体常常含有去污剂和细胞碎片，因此需要经过充分的洗涤才能用于本实验。

1. 将10mg包涵体沉淀溶解在5mL包涵体洗涤液中，超声波处理8次或充分吹 打混匀得包涵体悬液。可以适当预留此步得30uL包涵体悬液作为SDS-PAGE 电泳样品待用。其余的在4℃ 12000 rpm 离心20分钟，弃上清留沉淀。

2. 重复上面的洗涤步骤3次，每次预留30uL 包涵体悬液作为电泳样品待用。

3. 将包涵体沉淀溶解在1mL包涵体洗涤液中，超声波处理8次或充分吹打混匀 再得包涵体悬液。

4. 检查包涵体的纯度：将上步得到的包涵体悬液和前几步得到的包涵体悬液一起 用于SDS-PAGE 电泳，检查每次洗涤去除杂带的情况。

5. 检查包涵体的浓度：用自备的BCA蛋白检测试剂盒测试第4步得到的包涵体 悬液的蛋白质浓度。

6. 将第4步得到的包涵体悬液的蛋白质浓度调到5-10 mg/mL(如果测得值低于 此范围，则重复本实验，只是离心后用更少量的洗涤液溶解；如果测得值高于 此范围，则用适量洗涤液稀释)，然后将包涵体悬液均分到10个1.5mL塑料 离心管中，每管100 uL。

7. 4℃ 12000rpm 离心20分钟后弃上清。所得沉淀即纯化的、待用的包涵体。

二、确定溶解包涵体的jijia溶解液：

8. 标记上步得到的 10 个离心管，并分别加入 10种包涵体温和溶解液，每种 1 mL。注意：准确记录离心管编号和加入溶解液编号的对应关系。

9. 充分振荡后，室温放置30分钟。

10. 450 nm 检测浑浊度并记录下数据。

11. 4℃ 12000rpm 离心10分钟后收集上清，此溶液含有溶解的包涵体蛋白质。

12. 用0.22 um 注射器式滤膜过滤上步所得溶液。280 nm 检测其光吸收。

13. 溶解液溶解包涵体蛋白的能力跟包涵体溶液浊度跟成反比，跟溶解液OD280 光吸收成正比。根据上面的数据即可确定哪种溶解液对实验中所用包涵体具有jijia溶解能力（OD 值jigao者有大溶解包涵体蛋白的能力），并将选用此溶解液用于下面的复性实验。本试剂盒提供的10种包涵体溶解液均可以另购。

三．包涵体蛋白的复性：

14. 在2.5 mL 4℃预冷的、处于轻柔搅拌中的复性缓冲液中，逐滴加入上步得到 的OD280数值jigao的包涵体溶解液。

15. 待所有包涵体溶解液都加完后，将包涵体蛋白复性溶液用孔径为0.22 um 注 射器式滤膜过滤，除去包涵体（直径一般在0.5-0.8 um）和大的聚合物。 16. 将得到的复性蛋白溶液用于活性检测或离子交换柱层析和分子筛层析等实验。

技术资料：

包涵体

包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集，形成无活性的固体颗粒。一般含有 50%以上的重组蛋白，其余为核糖体成份、质粒DNA、脂多糖等，大小为0.5-1um， 难溶于水，只溶于变性剂如尿素、盐酸胍等。包涵体可以避免蛋白酶对表达蛋白的 降解，其形成降低了胞内表达蛋白的浓度，故有利于表达量的提高。此外，包涵体 中杂蛋白含量较低，且简单的低速离心就可将其分离纯化。后，包涵体对机械搅 拌和超声破碎不敏感，易于并与细胞膜碎片分离。

包涵体的形成原因之一是重组蛋白表达量过高，表达量越高越容易形成包涵 体。原因可能是合成速度太快，以至于没有足够的时间进行折叠，二硫键不能正确 的配对，过多的蛋白间的非特异性结合，蛋白质无法达到足够的溶解度等。原因之 二是重组蛋白含硫氨基酸较多，而脯氨酸的含量也与包涵体的形成呈正相关。此外， 发酵温度高或胞内pH接近蛋白的等电点也容易诱发包涵体的形成。异源重组蛋白 缺乏翻译后修饰所需酶类，致使中间体大量积累，也容易形成包涵体沉淀。共表达 分子伴侣的方法可以降低包涵体的形成。

关联产品：菌体内毒素清楚剂

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