快速cDNA合成(反转录)试剂盒

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用于快速的cDNA合成和高度可重复性的两步法RT-PCR

  • gDNA Removal Mix可消除gDNA带来的误差
  • 内质控可指示cDNA合成的质量
  • 高亲和性逆转录酶可实现宽线性范围的cDNA合成

独特的QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了含有基因组DNA去除方案和内质控的一种快速便捷的cDNA合成方法。gDNA Removal Mix可有效去除RNA样本中的基因组DNA污染,同时内质控RNA可以监测逆转录和扩增反应是否成功。QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了快速高效逆转录反应所需的一切。合成的cDNA适用于进行real-time PCR, 可以对任何mRNA区域的靶向序列进行可靠定量。
 

Performance
独特的gDNA Removal Mix可迅速有效去除RNA样本中的基因组DNA污染。去除基因组DNA污染对于获得精确基因表达结果非常关键,并且在不能设计出RNA特异性的引物时,例如当分析单外显子基因时,也需要去除基因组DNA污染。使用gDNA Removal Buffer可以节省时间和成本,因为不需要在反应中或反应后单独进行DNase消化。 

全新开发的内质控是一种成分明确的转录本(RNA分子),可直接加入您的样本并同时被逆转录为cDNA,可直接反应仪器或相应试剂是否正常,实验构建的体系是否存在错误,以及反应体系中是否存在抑制剂。预期的Cq (CT)范围可以用来确认逆转录和PCR扩增的成功与否,以及实验结果的可重复性。 

QuantiNova Reverse Transcriptase的高RNA亲和性确保您可从任何RNA模板获得高产率cDNA。即便是难扩增模板,如高GC含量或含有复杂二级结构的模板,也可被成功进行逆转录反应。Reverse Transcription Mix包含一种特别优化的oligo-dT和随机引物混合物,可以从包括5’区域在内的RNA转录本的任何位置进行cDNA合成。无论扩增靶标位于转录本的哪个位置,该试剂盒均能提供可供real-time PCR分析使用的高产量cDNA。同时对于低表达丰度的基因, 该试剂盒还可提供更高灵敏度的检测能力。 

QuantiNova Reverse Transcription Kit可在较宽的起始量范围内提供精确的结果,在标准的实验方案中起始RNA量可最高达5 µg,在特殊要求的实验条件下该用量可以加倍。 

Principle
QuantiNova Reverse Transcriptase具有高RNA亲和性,可以在极宽的模板量范围内(10 pg– 5 μg)合成cDNA(见图:5 µg–10 pg起始 RNA的精确定量)。无论扩增靶标位于转录本的哪个位置,该试剂盒可提供用于real-time PCR分析的高产量cDNA。即使难扩增模板,比如高GC含量或含有复杂二级结构的模板,也可被成功进行逆转录反应。QuantiNova RT Buffer经过优化,可兼容real-time PCR缓冲液。

为获得精确的real-time RT-PCR基因表达检测结果,非常重要的一点是保证只有cDNA被扩增和检测到。gDNA Removal Mix可迅速有效的去除基因组DNA干扰(见图:有效去除gDNA污染保证准确定量转录本)。使用gDNA Removal Mix节省了时间和成本,因为不需要在反应中或反应后单独进行DNase消化。同时,也无需设计RNA特异性引物或探针。

检测cDNA合成的差异度可以显示实验结果的可重复性。全新开发的内质控是一种成分明确的转录本(RNA分子),可直接加入您的样本并同时被逆转录为cDNA,可直接反应仪器或相应试剂是否正常,实验构建的体系是否存在错误,以及反应体系中是否存在抑制剂。因为内质控和真实转录本的性质相似,所以它可以在接下来的qPCR实验中用来确认逆转录和PCR扩增的成功与否(见图:内质控可靠检测是否存在抑制剂)。
 

QuantiNova Reverse Transcription Kit成分
成分 优势
gDNA Removal Mix 确保在real-time RT-PCR中只检测RNA
Internal Control RNA 确认RT-PCR成功与否
QuantiNova Reverse Transcriptase RNA模板量范围极宽(10 pg – 5 μg RNA)
高灵敏度
QuantiNova RT buffer system 逆转录难扩增模板
RT Primer Mix 从转录本任意区域合成cDNA,包括从5’区
 

Procedure
使用QuantiNova Reverse Transcription Kit进行基因组DNA去除和cDNA合成仅需20分钟。该试剂盒包含进行快速cDNA合成的所需的一切成分。

纯化后的RNA和gDNA Removal Mix简单孵育即可除去基因组DNA污染。和其它方法不同的是,RNA样本接下来可直接与Reverse Transcription Mix和Reverse Transcription Enzyme的预混液混合,进行逆转录反应。使用QuantiNova Reverse Transcriptase,逆转录反应可以在低温下进行,包括对于复杂的二级结构模板。反应在42°C的温度条件下进行保证了RNA的完整性,并随后在85°C进行酶灭活以终止反应。不需要进行额外的RNA变性或RNase H降解。

Applications
QuantiNova Reverse Transcription Kit可从任何起始材料(包括激光微切割样本或组织活检样本)获得高效及高灵敏度real-time RT-PCR结果。
 

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商品编号 商品品名 规格 品牌
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快速洗脱胶回收试剂盒

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低洗脱体积,从凝胶中纯化多达5 μg的DNA片段(70 bp到4 kb)

  • 非常小的洗脱体积
  • 纯化速度快,操作简单
  • 回收率高,重复性好
  • 含有凝胶上样染料,方便样本分析

MinElute Gel Extraction Kit含有离心柱、缓冲液和收集管,用于基于硅胶膜技术的DNA片段纯化,适用于从多达400 mg的凝胶胶条中纯化70 bp到4 kb的DNA。特殊设计的离心柱可将DNA洗脱至非常小的体积(10 μl),获得高产、高度浓缩的DNA。通过内置的pH指示剂可容易确定DNA结合到离心柱的最佳pH值。使用MinElute体系纯化的DNA片段可即用于各种应用,包括测序、微阵列分析、连接和转化、限制性酶切、标记、显微注射、PCR和体外转录。

 

Performance

MinElute Gel Extraction Kit纯化去除引物、核苷酸、酶、矿物油、盐、琼脂糖、溴化乙锭和DNA样品中的其他杂质,获得的高度浓缩的DNA可用于各种下游应用(参见”Higher DNA concentrations“)。

MinElute QIAquick Gel Extraction Kit提供用于凝胶纯化的离心柱。使用微型离心机或真空装置快速纯化70 bp–4 kb的高度浓缩的DNA。(4 kb–10 kb的DNA片段使用QIAquick Gel Extraction Kit纯化,而小于70 bp或大于10 kb的片段使用QIAEX II Gel Extraction System纯化。)

Principle

MinElute Kits采用硅胶膜式纯化柱,在高盐条件下结合DNA,低盐或水可洗脱DNA。硅胶膜技术避免了松散树脂和悬液状态的问题及不方便性。经优化的特制结合缓冲液,专用于选择性吸附特定大小范围内的DNA分子。

凝胶上样染料

为更快速、更方便地进行分析,提供上样染料。GelPilot Loading Dye含有3种示踪染料(xylene cyanol、bromophenol blue和orange G),便于优化凝胶运行时间,避免小片段DNA跑得过远(参见”GelPilot Loading Dye”)。

Procedure

MinElute体系应用简单的结合-洗涤-洗脱步骤(参见”MinElute procedure”)。凝胶碎片溶解在含有pH指示剂的缓冲液中,可方便确定DNA结合的最佳pH值(参见pH Indicator Dye),然后将混合物装载到MinElute离心柱上。在高盐条件下,核酸吸附在硅胶膜上。洗去杂质并用少量的低盐缓冲液或水洗脱DNA,可即用于各种下游应用。

操作

MinElute离心柱提供两种操作(参见”MinElute procedure”)。将离心柱放入传统的微型离心机或任何含有连接器的真空装置上,如带有QIAvac Luer Adapters的QIAvac 24 Plus。MinElute Gel Extraction Kit和QIAGEN的其他离心柱试剂盒,可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动进行,可提高产量,获得标准化结果。

Applications

MinElute或QIAquick System纯化的DNA片段可直接用于多种下游应用,包括:

  • 测序,包括第二代测序
  • 微阵列分析
  • 连接和转化
  • 限制性酶切
  • 标记
Features
Specifications
结合能力 5 µg
洗脱体积 10 µl
规格 Tube
片段大小 70 bp – 4 kb
处理 Manual
回收:寡核苷酸dsDNA Recovery: dsDNA fragments
样本类型:应用 DNA: PCR reactions
技术 Gel extraction

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超快速质粒中提试剂盒

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超快速纯化至多750 µg转染级纯质粒或柯斯质粒DNA

  • 少于60分钟制备时间
  • 无需离心即可澄清裂解液并进行异丙醇沉淀
  • 在沉淀过程中不会损失DNA
  • 可纯化至多750 µg高拷贝质粒DNA
  • 使用LyseBlue,获得最佳的裂解效果和最大的DNA产量

HiSpeed Plasmid Kits使用阴离子交换技术,超快速、大规模纯化得到质粒DNA,无需离心。得到的DNA相当于两次CsCl梯度离心处理得到的纯度,适合转染级纯度的应用。

 

Performance

HiSpeed Plasmid Kits提供QIAfilter Cartridges、HiSpeed Tips和QIAprecipitator模块,用于快速、大规模的制备质粒,无需真空底座。针筒规格的QIAfilter和QIAprecipitator模块取代了传统阴离子交换过程中的离心操作,质粒纯化更加方便、快捷。可从150–250 ml或50 µl – 150 ml的培养体积中纯化多至750 µg(Maxi)、或200 µg(Midi)的高拷贝质粒DNA(培养体积取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌和培养基)。HiSpeed Tip支持高流速,确保更快地完成DNA结合、洗涤和洗脱。

此外,HiSpeed tips中新型的阴离子交换树脂广泛用于核酸的纯化。其独特的分离特性使得到的DNA的纯度相当于两次氯化铯梯度离心处理得到的纯度。

Principle

QIAfilter Cartridges(参见”QIAfilter Cartridge”)是一种特制的过滤器,专用于取代细菌细胞碱裂解之后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可去除SDS沉淀,只需很短的离心时间即可澄清细菌裂解液。预装的HiSpeed tips依靠重力流运行,确保不会流干,减少了质粒制备的手工操作时间。

独特的QIAprecipitator模块(参见”QIAprecipitator module”)取代了异丙醇沉淀后传统的离心法纯化DNA。异丙醇混合液流过QIAprecipitator的时候DNA会结合上去,然后用TE缓冲液或水将DNA从QIAprecipitator洗脱下来。这一独特的模块降低了离心后转移上清液过程丢失DNA的风险。

Procedure

经中和的细菌裂解液放入QIAfilter Cartridge中,几秒内过滤澄清。滤出液放至HiSpeed tip进行质粒DNA 纯化(参见”QIAGEN Plasmid Kit procedures”)。 洗脱所得DNA与异丙醇混合并用注射器装入QIAprecipitator中。经浓缩和脱盐后,直接从QIAprecipitator上用TE缓冲液或水洗脱DNA。

Applications
HiSpeed Plasmid Kits纯化得到超纯转染级纯DNA,适合于多种应用,包括:克隆、测序、转染和质粒介导的基因沉默等。
 

Features
Specifications
应用 Transfection, cloning, sequencing, gene silencing
起始样本体积 150 µl – 250 ml culture volume
质粒类型 High-copy, cosmid DNA
处理 Manual (filtration)
每次处理样本量;通量 1 sample per run
技术 Anion-exchange technology
每次运行时间或处理样本数 <60 min
产量 <750 µg