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Small RNA Cloning Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	RR065	Small RNA Cloning Kit	10 Rxns	￥3,655

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■ 制品内容 (10 次量)

□ Package1 (-20℃保存)   RNase Inhibitor (40 U/μl) 50 μl 10X BAP Buffer 200 μl Alkaline Phosphatase (BAP) (0.4 U/μl) 20 μl 0.1%BSA 60 μl 3’Adaptor*1*2 10 μl T4 RNA Ligation Buffer 600 μl T4 RNA Ligase (40 U/μl) 20 μl 5X T4 PNK Buffer 100 μl T4 Polynucleotide Kinase (T4 PNK) (10 U/μl) 10 μl 5’Adaptor*1 10 μl 5X RT Buffer 40 μl dNTP Mixture (2.5 mM each) 90 μl PCR-R & RT-Primer (50 pmol/μl)*1*3 20 μl RTase (RNaseH free) (200 U/μl) 10 μl 2X PCR Buffer 250 μl PCR Primer F (50 pmol/μl)*1 10 μl TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl) 10 μl Control RNA (5 pmol/μl)*4 10 μl □ Package2 (4℃保存)   3M Sodium Acetate (pH 5.2) 200 μl Dr.GenTLE Precipitation Carrier*5 80 μl 2X B/W Buffer 2.7 ml Magnosphere™ MS300/Streptavidin 100 μl RNase free dH2O 10 ml   *1 3’Adaptor、5’Adaptor、PCR Primer F及PCR-R、RT-Primer上都带有Sse8387Ⅰ酶切位点，使用Sse8387Ⅰ酶切后的PCR产物可以与Pst I酶切的载体进行连接克隆。本试剂盒中不备有限制酶和克隆用载体，请另外准备。 *2 3’Adaptor已用生物素标记。 *3 PCR用的Reverse Primer，也可以作为反转录引物使用。 *4 Control RNA是一条21mer、5’端磷酸化的RNA。 *5 Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094)。

■ 制品说明

近几年的研究表明，在细胞内发现的RNA中有许多是非编码RNA，它们有着重要的功能，这些RNA被称为功能性RNA，其中倍受关注的是18-26 个碱基的低分子RNA，这些低分子RNA的功能有： ① mRNA水平抑制基因表达。 ② 翻译水平抑制基因表达。 克隆是分析小RNA的有效方法之一。由于小RNA与mRNA不同，它不具有PolyA tail，因此，在克隆时，需在小RNA的5’端和3’端分别加上RNA接头或者RNA/DNA杂合形式的接头，经RT-PCR后进行PCR。 本试剂盒主要用于cDNA的合成和小RNA的克隆。 试剂盒通过简单的磁珠吸附操作即可纯化小RNA反转录得到的cDNA，省去了在接头连接之后切胶回收等复杂操作步骤。扩增得到的cDNA可以直接用于TA克隆，或者利用接头中带有的酶切位点进行克隆。 使用本试剂盒对小RNA (Small RNA) 进行克隆时的操作流程见图1。起始的Small RNA是由总RNA 经过电泳及切胶回收得到的。详细步骤如下： 1. 将Small RNA进行BAP处理，5’端去磷酸化。 2. 将带有生物素标记的RNA/DNA杂合形式的接头与BAP处理后的Small RNA的3’端进行连接。 3. 用标记Streptoavidin的磁珠，回收带有生物素标记接头的Small RNA，然后进行5’端磷酸化反应。 4. 将5’端连接上RNA/DNA嵌合的接头后，使用RT Primer和反转录酶进行反转录反应。 5. 从磁珠上回收合成的cDNA后，进行PCR反应。 6. PCR片段克隆。

■ 各种引物及Control RNA的碱基序列

名 称 切 点 酶 例 PCR-R & RT-Primer     5’-GTCTCTAG CCTGCAGG ATCGATG-3’ 反转录反应及PCR反应的Reverse引物，含有Sse8387Ⅰ的识别序列 (阴影部分)。 PCR-Primer F 5’-AAAGAT CCTGCAGG TGCGTCA-3’ PCR反应的Forward引物，含有Sse8387Ⅰ的识别序列 (阴影部分)。 Control RNA     5’p-AGAUGACGGCAACUACAAGAC-3’ 用于Control反应。

■ small RNA克隆流程图

页面更新：2021-04-19 10:45:43