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E.coli DH5α Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

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E.coli DH5α Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9057 E.coli DH5α Competent Cells 100 μl × 10 ￥300 E.coli DH5α Competent Cells E.coli DH5α Competent Cells E.coli DH5α Competent Cells
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E.coli DH5α Competent Cells
E.coli DH5α Competent Cells  
E.coli DH5α Competent Cells
 
 
■ 制品内容E.coli DH5α Competent Cells
E.coli DH5α Competent Cells 100 μl × 10
pUC19 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:       2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E.coli DH5α Competent Cells。 E.coli DH5α Competent Cells在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性)，通过蓝白斑方法可以很容易地鉴别重组体菌株。由于菌株无lac lq，故不需要IPTG。因此，当制作基因文库或进行亚克隆时，可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
 
■ 细胞浓度
1 - 2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E.coli DH5α : F-, φ 80dlacZ ΔM15, Δ(lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi -1, gyrA96 , relA1
 
■ 保存
-80℃。
注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化效率将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量控制
1. 转化效率
转入1 ng 的pUC19，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pUC19
 
2. β-半乳糖苷酶的α-互补性
当使用pUC19 plasmid进行转化时，含有100 μg/ml Ampicillin和60 μg/ml X-Gal的L-agar plate出现蓝色菌落。
 
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD company Code: 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不要超过10 ng。否则转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。
    ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。
    ·φ b-broth: Ingredient per liter water  
  Tryptone 20 g  
  Yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。
6. 当加入X-Gal时，按照以下操作进行：
    ·将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到 agar培养基中。
7. DH5α可用于M13mp载体的复制。但由于其不携带F因子，因而不能形成菌斑。
8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

页面更新：2020-05-22 14:26:31

E. coli MV1184 Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

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E. coli MV1184 Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9055 E. coli MV1184 Competent Cells 100 μl × 10 ￥530 E. coli MV1184 Competent Cells E. coli MV1184 Competent Cells E. coli MV1184 Competent Cells
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■ 制品内容E. coli MV1184 Competent Cells
E. coli MV1184 Competent Cells 100 μl × 10
pUC119 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium      2%   tryptone
 0.5%   yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara公司在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出E.coli MV1184 Competent Cells，当1 ng pUC119转化100 μl 细胞时，转化效率可达1×107 cfu/μg。
E.coli MV1184宿主具有琥珀突变抑制因子，只允许没有发生琥珀突变的载体进行复制，可以用作琥珀突变DNA的选择宿主。同时本宿主含有F’质粒，也可作为M13 phage载体DNA的宿主菌，制备单链DNA。此外，本宿主在使用pUC系列质粒载体或M13 phage载体进行转化或转染时，具有α-互补性，可以通过在培养基中加入X-Gal 和 IPTG进行蓝白筛选。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside
 
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli MV1184：ara,△(lac-proAB),rpsL, thi (Φ80lacZ△M15), △(srl-recA) 306::Tn10 (tet r) / F’ [traD36, proAB+, lac Iq, lacZ△M15]
 
■ 保存
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC119 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 转化效率
按照“质粒载体转化”的使用方法，使用1 ng 的pUC119转化到100 μl E. coli MV1184 Competent Cells中，在含有氨苄青霉素的LB平板上筛选，转化效率 : >1 x 107 cfu/μg pUC119
 
 

页面更新：2021-02-09 08:46:32

Chaperone Competent Cell BL21 Series酶试剂盒Takara Clontech

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Chaperone Competent Cell BL21 Series
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set ￥2,613 Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series
Takara 9121 Chaperone Competent Cell pG-KJE8/BL21 100 μl × 10 ￥764 Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series
Takara 9122 Chaperone Competent Cell pGro7/BL21 100 μl × 10 ￥535 Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series
Takara 9124 Chaperone Competent Cell pG-Tf2/BL21 100 μl × 10 ￥1,106 Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series
Takara 9125 Chaperone Competent Cell pTf16/BL21 100 μl × 10 ￥1,232 Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series
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■ 制品内容Chaperone Competent Cell BL21 Series（Code No.: 9120：100 μl × 3 × 6 种）
● Chaperone Competent Cells BL21 Set (Code No.: 9120)
1. Chaperone Competent Cells pG-KJE8/BL21 3 × 100 μl
2. Chaperone Competent Cells pGro7/BL21 3 × 100 μl
3. Chaperone Competent Cells pKJE7/BL21 3 × 100 μl
4. Chaperone Competent Cells pG-Tf2/BL21 3 × 100 μl
5. Chaperone Competent Cells pTf16/BL21 3 × 100 μl
6. TaKaRa Competent Cell BL21 3 × 100 μl
7. pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 1× 10 μl
8. SOC medium* 18 × 1 ml
   
● Chaperone Competent Cells pG-KJE8/BL21 (Code No.: 9121)
● Chaperone Competent Cells pGro7/BL21 (Code No.: 9122)
● Chaperone Competent Cells pG-Tf2/BL21 (Code No.: 9124)
● Chaperone Competent Cells pTf16/BL21 (Code No.: 9125)
1. Competent Cell 10 × 100 μl
2. pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 1× 10 μl
3. SOC medium* 10 × 1 ml
*SOC medium:       2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
 10 mM   MgSO4
 10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
     
 
■ 制品说明
Chaperone Competent Cell BL21 Series是由五种分别转化一种伴侣蛋白质粒 (Chaperone Plasmid Set (Code No.: 3340)) 的Escerichia coli BL21制成的感受态细胞。
众所周知，分子伴侣参与蛋白质折叠过程，且人们已经通过大量的实验研究来表明体内蛋白折叠机理。 本制品中含有五种类型的质粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2、pTf16)，每一种质粒都是能有效表达一组协同作用、共同参与蛋白折叠的被称作“Chaperone team”的分子伴侣。靶蛋白与其中一种“Chaperone team”共同表达，便可增加可溶性蛋白质的回收比率，而用通常方法，由于包涵体的形成，这些表达蛋白质常常是不可回收的。
E.coli BL21来源于B株，为Lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型。因此，表达的外源蛋白质在该体系中有更高的稳定性。
当进行靶蛋白与“Chaperone team”共表达实验时，通常需要三步：
1. 用伴侣蛋白质粒转化宿主E.coli； 2. 用转化体制备感受态细胞；3. 用质粒转化感受态细胞并表达靶蛋白。如果使用本产品，只需一步转化就可构建靶蛋白与“Chaperone team”的共表达体系，因为使用的E.coli BL21感受态细胞已转化有一种伴侣蛋白质粒。另外，此感受态细胞有五种质粒，不含有伴侣蛋白质粒的TaKaRa Competent BL21也可作为对照。
每种E.coli BL21感受态细胞包括一种伴侣蛋白质粒，非常适合pCold DNA系列的表达。但该产品不适合于启动子为T7的蛋白质表达体系，如pET系列，因为，宿主E.coli BL21菌株不表达T7 RNA聚合酶。
注意：本产品不可用于电击法转化。
 
■ DNA序列
  pG-KJE8 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pGRO7 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pG-TF2 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pKJE7 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pTf16 DNA (Fasta形式的txt文件)
 
■ 保存
-80℃。
注意：如果不是-80℃保存，转化效率将会降低。此时，可在使用前用附带的pUC19做转化实验，确认转化效率。不能保存在液氮中。
 
■ 转化效率
Chaperone competent cells：转化1 ng pUC19，涂于Cm+和Amp+平板上进行筛选。
TaKaRa competent cell BL21：转化1 ng pUC19，涂于Amp+平板上进行筛选。
转化效率≥1×106 cfu/μg pUC19
 
■ Genotype
E.coli BL21 : F–, ompT, hsdSB (rB–mB–), gal, dcm
 
■ 注意事项
1. 从-80℃中只取出实验所用的感受态细胞，然后立即放入干冰/EtOH bath。开始实验前不要取出。
2. 可使用1.5 ml microtube替代FALCON tube，但可能会降低效率。
3. 使用100 μl感受态细胞转化时，高纯度DNA使用量不要超过10 ng，否则转化效率会降低。
4. 转化体系改变 (如感受态细胞使用量发生改变) ,或换用了其它tube等，需研讨转化条件 (如使用一般的1.5 ml tube时，请于42℃保温60秒)。
5. 除SOC培养基外，L-broth及φb-broth也可使用，但转化效率会有所下降。
6. 稀释时，使用SOC培养基。
7. L-broth plate : 成份 per liter  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1N NaOH调整到pH7.5，添加agar到1.5%，高压灭菌。
8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。
9. 本制品中含有的伴侣蛋白质粒带有来源于pACYC的复制起点和氯霉素抗性基因 (Cmr)，E.coli表达系统中可以使用常用的ColE1型、具氨苄抗性 (Ampr)筛选标记的表达载体，但不可与含有氯霉素抗性基因的表达质粒共同使用。
 

页面更新：2022-08-23 16:20:56