日度归档：2023年10月28日

T5 核酸外切酶–NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 核酸酶

T5 核酸外切酶                              收藏

货 号
规 格
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#M0663L
5,000 units
3,279.00
无
无
无
无
有

#M0663S
1,000 units
809.00
有
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产品信息

 该产品是 T5 核酸外切酶（NEB #M0363）的替代产品。T5 核酸外切酶--NEB酶试剂 New England Biolabs

   ·双链 DNA 特异性核酸外切酶、单链 DNA 核酸内切酶

   ·从线性化或切刻双链 DNA 的 5’末端起始消化

   ·沿 5’→3’方向切割线性化或切刻双链 DNA

浓度

 10,000 units/ml

T5 核酸外切酶应用

 · 从完全连接的环状双链 DNA 中，去除不完全连接产物

   · 降解碱裂解质粒提取方法中产生的变性 DNA，提高 DNA 克隆效率

   ·降解质粒样品中污染的线性化和切刻 DNA 

概述

 T5 核酸外切酶沿 5’→3’方向降解 DNA（1）。它既能从 5’末端起始消化，也能从线性或环状双链 DNA 的切刻或缺口处起始消化（1）。但不能降解超螺旋双链 DNA（2）。T5 核酸外切酶还具有单链 DNA 核酸内切酶活性。

特性

 ·降解线性单链、双链 DNA 或切刻质粒 DNA，但对超螺旋质粒 DNA 不起作用

   ·去除碱裂解质粒提取过程中产生的变性 DNA（3）

   ·提高小提制备的cDNA 文库质粒的转染效率（4）

 

来源

纯化自含有 T5 噬菌体 D15 基因质粒的 E.coli 菌株， D15 基因融合有 His 标签。

单位定义

 1 单位指在 CutSmart 反应缓冲液中，37℃ 条件下，每分钟引起 0.00032 A260 nm 变化所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com

反应条件

 1X NEBuffer 4，37℃ 温育

质保声明

 T5 核酸外切酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com

参考文献

1.  Sayers, J.R. et al. (1991). Nucleic Acids Res. 19, 4127-4132.

   2.  Sayers, J.R. et al. (1990). J. of Biol. Chem. 265, 18311-18317.

   3.  Sayers, J.R. et al. (1996). Analytical Biochem. 241, 186-189.

   4.  Kiss-Toth, E. et al. (2001). Analytical Biochem. 288, 230-232.

T4 DNA Ligase酶试剂盒Takara Clontech

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上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

T4 DNA Ligase
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 2011A T4 DNA Ligase 25,000 U ￥130 T4 DNA Ligase T4 DNA Ligase T4 DNA Ligase
Takara 2011B (A × 5) T4 DNA Ligase 25,000 U × 5 ￥585 T4 DNA Ligase T4 DNA Ligase T4 DNA Ligase
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■ 制品内容
T4 DNA Ligase (350 U/μl) 25,000 U
10X T4 DNA Ligase Buffer 1 ml
 
■ 制品说明
本酶催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需Mg2+和ATP作辅因子，分子量为62,000，最适反应pH为7.6。本酶可以催化粘性末端之间和平滑末端之间的DNA的连接。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 起源
Escherichia coli carrying the plasmid that encodes the gene of T4 DNA ligase
 
■ 活性定义
在20 μl的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ的分解物在16℃下反应30分钟时，有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。
本酶的1 unit相当于在含有6.6 mM MgCl2，10 mM DTT，66 μM ATP和3.3 μM [32P]-Na4P2O7的66 mM Tris-HCl (pH7.6) 中发生ATP-PPi交换反应的0.008 Weiss Unit。
 
■ 用途
1. DNA片段和载体DNA的连接。
2. DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。
 
■ 注意事项
连接反应因末端碱基序列的不同而反应速度各异，一般有下列倾向 (由快至慢)：
突出末端：Hind III＞Pst I＞EcoR I＞BamH I＞Sal I
平滑末端：Hae III＞Alu I＞Hinc II＞Sma I
          EcoR V＞Sca I＞Pvu II＞Nru I
其中连接Hind III 末端的速度约为连接Sal I 末端速度的10～40倍；
而连接Hae III 末端的速度约为连接Sma I 末端速度的5～10倍。
 
 

页面更新：2021-08-09 16:36:35

Tth Argonaute 蛋白 (TtAgo)–NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – Argonaute 蛋白

Tth Argonaute 蛋白 (TtAgo)                              收藏

Tth Argonaute 蛋白 (TtAgo)--NEB酶试剂 New England Biolabs

货 号
规 格
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#M0665S
50 pmol
919.00
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有

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特性

TtAgo 来自嗜热栖热菌，是一种可编辑的核酸内切酶，在 5’ 磷酸化的单链 DNA（ssDNA） 指导下能够切割底物靶序列，在底物与向导 DNA 互补序列的磷酸二酯键处产生断裂。

·所需 5’ 磷酸化 ssDNA 长度短，仅 16 -18 nt，成本低，可用 NEB T4 PNK 进行磷酸化

·向导/靶标序列的选择不受相邻序列限制

·对 ssDNA 和大多数双链 DNA（dsDNA）底物活性较高（在 dsDNA 底物上产生切刻），对 ssRNA 底物也有一定活性

·适用于体外应用

·参考 Tth Argonaute (TtAgo) 实验的优化指南

 

概述

 TtAgo 是一种来自革兰氏阴性嗜热栖热菌（Thermus thermophiles）的原核 argonaute 蛋白，在 5′-磷酸化单链 DNA（16 – 18 nt）指导下，可发挥 DNA 介导的核酸内切酶作用。在二价 Mg2+（或Mn2+）金属离子存在时，该酶具有类 RNase H 活性（见产品使用说明 #1），并在与 DNA 向导链第 10 和 11 个碱基互补的碱基处切割底物。

 
TtAgo 工作示意图
Tth Argonaute 蛋白 (TtAgo)--NEB酶试剂 New England Biolabs
TtAgo 在 65-85℃ 时具有活性（见产品使用说明 #2），对 ssDNA 活性最高，其次是 dsDNA，对单链 RNA（ssRNA）底物活性最低。该酶与单链向导 DNA 协同作用时，不会切割 dsDNA ，而只是切刻与向导 DNA 链互补的底物 DNA 链。该酶对双链 RNA（dsRNA）底物无活性。切割后的 5’ 和 3’ 末端产物可进行下游连接（1）。结果表明，在某些情况下，反应中加入热稳定单链 DNA 结合蛋白（ET-SSB，NEB #M2401）和/或热稳定解旋酶有助于切割 dsDNA 底物。
 
无向导 DNA 的 TtAgo 会通过 “剪切” 来降解 dsDNA，这被认为是 TtAgo 从入侵的或外源 DNA 中自发产生向导 DNA 的机制。（2）为防止这种非特异性活性的产生，向导 DNA 的摩尔量应超过 TtAgo 量的 5 倍。此外，向导链要与 TtAgo 一起在 ～75℃ 条件下孵育 10-30 分钟，形成核蛋白复合物后再加入底物进行反应。更多详细信息，请参阅操作步骤、说明书和使用说明。
 
TtAgo 适用于体外应用。
 
随酶提供的试剂
ThermoPol 反应缓冲液套装
 
浓度
1 µM
 
来源
TtAgo 纯化自携带革兰阴性嗜热栖热菌（Thermus thermophilus）克隆基因的大肠杆菌菌株，该克隆基因是 N 端含 6X His 标记的融合基因。
 

 

保存温度

-20°C
 
质保声明 
TtAgo 蛋白经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
 
参考文献
1. Hunt, E. A., Evans Jr, T. C., & Tanner, N. A. (2018). Single-stranded binding proteins and helicase enhance the activity of prokaryotic argonautes in vitro. PloS One. 13 (8), e0203073.
2. Swarts, D., Szczepaniak, M., Sheng, G., Chandradoss, S., Zhu, Y., & Timmers, E. et al. (2017). Autonomous Generation and Loading of DNA Guides by Bacterial Argonaute. Molecular Cell.. 65 (6), 985-99.