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| ■ 制品说明 |
腺相关病毒 (AAV) 是Dependovirus属Parvovirus家族的无包膜病毒。AAV对人无致病性，只有在辅助病毒如腺病毒或疱疹病毒存在下才能复制。AAV基因组是约4.7 kb的单链线状DNA分子，在每个末端都有发夹结构的反向末端重复序列 (ITRs) ，ITRs的功能在于基因组复制起始位点及包装病毒粒子。AAV基因组包含了3个开放阅读框 (图1) ：Rep编码参与复制和转录的蛋白质；Cap编码病毒衣壳蛋白质；AAP编码用于病毒粒子形成的非结构蛋白质。Rep区域编码4种不同的蛋白质 (Rep78, Rep68, Rep52和Rep40) ，Cap区域编码3种不同的蛋白质 (VP1, VP2和VP3) 。
AAV有100多种血清型，不同血清型病毒间的宿主特异性和特点有所不同。Takara Bio Inc.提供AAV 1型 (AAV1) 、2型 (AAV2) 、5型 (AAV5) 、6型 (AAV6) 的制备试剂盒。2型 (AAV2) 具有广泛的研究应用，包括基因治疗，也具备泛嗜性特点。而AAV1、AAV5和AAV6却受限于组织宿主。AAV1对于肌肉、肝脏、呼吸道和中枢神经系统有高转导效率；AAV5对于中枢神经系统、肝脏和视网膜有高转导效率；AAV6对于心肌细胞、肌肉和肝脏有高转导效率。
腺相关病毒载体 (AAV载体) 能够转导基因进入细胞和生物体，可用作研究工具和基因治疗的载体。另外，AAV载体较腺病毒载体和逆转录病毒载体更安全。AAV载体能用于转导基因进入增殖和非增殖细胞，以及在未分裂细胞内的长期表达，AAV很少有免疫原性，非常适用于转导基因进入动物体内 (作为体内转导工具) 。 |
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| ■ 制品特点 |
使用AAV Helper Free System制备AAV病毒
AAV Helper Free System是一种特别的可制备高滴度AAV的无辅助病毒系统 (图2) 。6230试剂盒包含3种质粒，只需将制备AAV病毒所需的这3种载体质粒转染于HEK293细胞中，即可制备AAV病毒。
·pRC2-mi342 Vector：包含AAV2的Rep基因和Cap基因
*pRC2-mi342可表达hsa-miR-342，hsa-miR-342是一种病毒制备系统中可提高病毒滴度的人源miRNA。与一般 只表达Rep基因和Cap基因的pRC2 Vector相比，病毒滴度可提高2倍。
·pHelper Vector：包含腺病毒的E2A、E4和VA基因的载体质粒。
·pAAV-CMV Vector：包含目的基因表达启动子和2个ITR的载体质粒。质粒包含目的基因克隆（GOI）位点，GOI 由CMV启动子表达。由于AAV病毒中能够包装的插入DNA大小有限，使用试剂盒中pAAV-CMV Vector时，插入的DNA片段大小应在2.5 kb以下。 |
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| 图2.使用AAVpro Helper Free System 制备AAV病毒 |
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| ■ 制品内容 |
| AAVpro® Helper Free System (AAV1) （Code No. 6673） |
| pAAV-CMV Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| pRC1 Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| pHelper Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| AAV Extraction Solution A |
1.5 ml×3 |
| AAV Extraction Solution B |
150 μl×3 |
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| Limited Use Label License: [M84] |
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| AAVpro® Helper Free System (AAV2)（Code No. 6230） |
| pAAV-CMV Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| pRC2-mi342 Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| pHelper Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| AAV Extraction Solution A |
1.5 ml×3 |
| AAV Extraction Solution B |
150 μl×3 |
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| Limited Use Label License: [M83], [M84] |
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| AAVpro® Helper Free System (AAV5) （Code No. 6650） |
| pAAV-CMV Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| pRC5 Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| pHelper Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| AAV Extraction Solution A |
1.5 ml×3 |
| AAV Extraction Solution B |
150 μl×3 |
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| Limited Use Label License: [M84] |
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| AAVpro® Helper Free System (AAV6) （Code No. 6651） |
| pAAV-CMV Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| pRC6 Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| pHelper Vector (1 μg/μl) |
20 μl |
| AAV Extraction Solution A |
1.5 ml×3 |
| AAV Extraction Solution B |
150 μl×3 |
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| Limited Use Label License: [M84] |
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| AAVpro® Packaging Plasmid (AAV1) （Code No. 6672） |
| pRC1 Vector (1 μg/μl) |
0.5 ml×2 |
| pHelper Vector (1 μg/μl) |
0.5 ml×2 |
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| AAVpro® Packaging Plasmid (AAV2) （Code No. 6234） |
| pRC2-mi342 Vector (1 μg/μl) |
0.5 ml×2 |
| pHelper Vector (1 μg/μl) |
0.5 ml×2 |
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| Limited Use Label License: [M83] |
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| AAVpro® Packaging Plasmid (AAV5) （Code No. 6664） |
| pRC5 Vector (1 μg/μl) |
0.5 ml×2 |
| pHelper Vector (1 μg/μl) |
0.5 ml×2 |
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| AAVpro® Packaging Plasmid (AAV6) （Code No. 6665） |
| pRC6 Vector (1 μg/μl) |
0.5 ml×2 |
| pHelper Vector (1 μg/μl) |
0.5 ml×2 |
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| ■ 各载体序列 |
zip压缩形式，点击查看：
· pAAV-CMV（fasta data）
· pAAV-LacZ（fasta data）
· pHelper（fasta data）
· pRC1（fasta data）
· pRC5（fasta data）
· pRC6（fasta data）
· pRC2-mi342（fasta data）
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| ■ 保存 |
-20℃。
AAV Extraction Solution A 和AAV Extraction Solution B融解后，请于室温保存。
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