标签归档：大提

血液DNA大提试剂盒

发表于由

上海金畔生物科技代理销售血液DNA大提试剂盒，欢迎访问官网了解更多产品信息。

从血液中纯化基因组DNA、线粒体DNA或病毒DNA，最高可达600 μg

  • 快速纯化高品质，即用型DNA
  • 无需有机提取或乙醇沉淀
  • 重复性好，产量高
  • 完全去除污染物和抑制剂

QIAamp DNA Blood Maxi Kit应用硅胶模技术，用于实验室从全血、血浆、血清和其它体液中纯化DNA。QIAamp DNA Blood Maxi Kit可处理3–10 ml新鲜或冷冻的人类全血。QIAamp Maxi离心柱可在离心机或真空装置上处理（使用真空装置需要额外的缓冲液AW1 [货号：19081]和AW2 [货号：19072] ）。

 

Performance

QIAamp DNA Blood Kits根据样本存储条件和新鲜程度不同，可纯化获得200 bp–50 kb的DNA（参见”Apoptotic banding in stored blood”）。纯化的DNA适用于长片段PCR扩增（参见”Long-range PCR”）和RFLP分析等等，如亲子鉴定（参见”Paternity testing by RFLP analysis”）。

使用QIAamp DNA Blood Maxi Kit获得DNA的回收率可高达95.8%，依初始细胞密度而定（见表）。

从不同细胞密度的人类全血中纯化的DNA产量
白细胞/ ml DNA产量（µg） DNA回收率（%）
2.5 x 105 15.8 95.8
1.0 x 106 60.4 91.5
5.0 x 106 312.0 94.5
1.0 x 107 624.6 94.6
使用QIAamp DNA Blood Maxi Kit,从10 ml人类全血中纯化得到基因组DNA，并用1 ml洗脱液洗脱。第一次的洗出液再次上样到离心柱并离心（即：再洗脱）。假设一个白细胞包含6.6 pgDNA，计算DNA回收率。

Principle

无需苯酚-氯仿抽提。DNA特异性结合到QIAamp硅胶膜上，让污染物流过。PCR抑制物，如：二价阳离子和蛋白，可通过两步有效的洗涤步骤被完全去除，结合在离心柱上的纯核酸可用水或试剂盒中的缓冲液洗脱。

Procedure

QIAamp DNA Blood Maxi Kit采用快速离心柱操作简化了从全血或相关体液中纯化DNA的流程（参见”procedure”）。该试剂盒可处理带有EDTA、柠檬酸盐和肝素等常规抗凝剂的新鲜或冷冻的全血样本。QIAamp DNA Blood Maxi Kit可处理3–10 ml的样本，制备时间55分钟。可从10 ml健康全血中获得300–600 µg DNA，洗脱体积500–2000 µl。

QIAamp DNA Blood Kits提供全面的操作手册，包括从不同来源的样本中纯化DNA的操作流程。QIAamp样本制备技术已完全经过验证。

Applications

QIAamp DNA Blood Maxi Kit使用经验证的QIAamp技术，采用带有50 ml收集管的Maxi离心柱从不同来源的样本中纯化DNA。样本来源包括：

新鲜和冷冻的全血或白膜层
血浆或血清
骨髓
淋巴细胞
体液
 

Features
Specifications
应用 PCR, blotting
洗脱体积 500–2000 µl
规格 Spin column
主要样本类型 Whole blood, body fluids
处理 Manual (centrifugation or vacuum)
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 Genomic DNA, mitochondrial DNA, viral DNA
样本量 3–10 ml
技术 Silica technology
每次运行或制备时间 55 minutes
产量 300–600 µg

 

相关产品      
商品编号 商品品名 规格 品牌
51192 血液DNA大提试剂盒 10T Qiagen
51194 血液DNA大提试剂盒 50T Qiagen
51185 血液DNA中提试剂盒 100T Qiagen
51183 血液DNA中提试剂盒 20T Qiagen

超快速质粒大提试剂盒

发表于由

上海金畔生物科技代理销售超快速质粒大提试剂盒，欢迎访问官网了解更多产品信息。

超快速纯化至多750 µg转染级纯质粒或柯斯质粒DNA

  • 少于60分钟制备时间
  • 无需离心即可澄清裂解液并进行异丙醇沉淀
  • 在沉淀过程中不会损失DNA
  • 可纯化至多750 µg高拷贝质粒DNA
  • 使用LyseBlue，获得最佳的裂解效果和最大的DNA产量

HiSpeed Plasmid Kits使用阴离子交换技术，超快速、大规模纯化得到质粒DNA，无需离心。得到的DNA相当于两次CsCl梯度离心处理得到的纯度，适合转染级纯度的应用。

 

Performance

HiSpeed Plasmid Kits提供QIAfilter Cartridges、HiSpeed Tips和QIAprecipitator模块，用于快速、大规模的制备质粒，无需真空底座。针筒规格的QIAfilter和QIAprecipitator模块取代了传统阴离子交换过程中的离心操作，质粒纯化更加方便、快捷。可从150–250 ml或50 µl – 150 ml的培养体积中纯化多至750 µg（Maxi）、或200 µg（Midi）的高拷贝质粒DNA（培养体积取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌和培养基）。HiSpeed Tip支持高流速，确保更快地完成DNA结合、洗涤和洗脱。

此外，HiSpeed tips中新型的阴离子交换树脂广泛用于核酸的纯化。其独特的分离特性使得到的DNA的纯度相当于两次氯化铯梯度离心处理得到的纯度。

Principle

QIAfilter Cartridges（参见”QIAfilter Cartridge”）是一种特制的过滤器，专用于取代细菌细胞碱裂解之后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可去除SDS沉淀，只需很短的离心时间即可澄清细菌裂解液。预装的HiSpeed tips依靠重力流运行，确保不会流干，减少了质粒制备的手工操作时间。

独特的QIAprecipitator模块（参见”QIAprecipitator module”）取代了异丙醇沉淀后传统的离心法纯化DNA。异丙醇混合液流过QIAprecipitator的时候DNA会结合上去，然后用TE缓冲液或水将DNA从QIAprecipitator洗脱下来。这一独特的模块降低了离心后转移上清液过程丢失DNA的风险。

Procedure

经中和的细菌裂解液放入QIAfilter Cartridge中，几秒内过滤澄清。滤出液放至HiSpeed tip进行质粒DNA 纯化（参见”QIAGEN Plasmid Kit procedures”）。 洗脱所得DNA与异丙醇混合并用注射器装入QIAprecipitator中。经浓缩和脱盐后，直接从QIAprecipitator上用TE缓冲液或水洗脱DNA。

Applications
HiSpeed Plasmid Kits纯化得到超纯转染级纯DNA，适合于多种应用，包括：克隆、测序、转染和质粒介导的基因沉默等。
 

Features
Specifications
应用 Transfection, cloning, sequencing, gene silencing
起始样本体积 150 µl – 250 ml culture volume
质粒类型 High-copy, cosmid DNA
处理 Manual (filtration)
每次处理样本量；通量 1 sample per run
技术 Anion-exchange technology
每次运行时间或处理样本数 <60 min
产量 <750 µg

相关产品      
商品编号 商品品名 规格 品牌
12662 超快速质粒大提试剂盒 10T Qiagen
12663 超快速质粒大提试剂盒 25T Qiagen

去内毒素质粒大提提取试剂盒

发表于由

去内毒素质粒大提提取试剂盒 
EndoFree Plasmid Maxi Kit 
产品编号： 12362  CAS号：  
分子式：   分子量：  
EINECS编号：  

纯化得到至多10 mg的无内毒素高转染级纯质粒或柯斯质粒DNA

  • 纯化得到的DNA内毒素水平低于0.1 EU/µg
  • 纯化流程快，同时去除内毒素
  • 获得高产量、高拷贝质粒DNA
  • 使用LyseBlue，获得最佳的裂解和高产量的DNA

EndoFree Plasmid Kits基于阴离子交换技术，可快速制备不含内毒素的质粒DNA。QIAfilter Cartridges过滤快速澄清裂解液。制备的DNA纯度超过两次CsCl梯度离心法所得DNA的纯度，适合超转染级纯的应用。EndoFree Plasmid Buffer Set可用于制备10次mega规模或5次giga规模转染级纯质粒或科斯质粒DNA制备。

 

Performance

EndoFree Plasmid Kit将高效的内毒素去除步骤整合到质粒纯化流程中，不需要额外步骤，也不需用亲和柱去除脂多糖。通过QIAfilter Mega-Giga Cartridge过滤细菌裂解液，并使用重力流QIAGEN-tip阴离子交换柱纯化质粒DNA。产量可达10 mg（Giga）、2.5 mg（Mega）、500 μg（Maxi）DNA。纯化的DNA无内毒素（<0.1 EU/µg DNA）。

选用EndoFree Plasmid Mega Kit而非EndoFree Plasmid Giga Kit纯化低拷贝质粒和科斯质粒，将会得到更好的效果，因为后者需要较大的培养体积，而QIAfilter Mega-Giga Cartridge的容量有限。

EndoFree Plasmid Kits去除细菌在裂解过程中释放的内毒素，内毒素会影响原代细胞和敏感培养细胞的DNA转染。从EndoFree Plasmid Kits得到的无内毒素DNA高度适用于可重复且结果可靠的转染（参见”Plasmid purification method versus transfection efficiency”和”Plasmid purity versus transfection efficiency”及表”Endotoxin levels in plasmid preparations”和”EndoFree DNA yields high transfection efficiencies with primary cells”）。QIAGEN超纯无内毒素DNA也适用于基因治疗研究和其他敏感应用。

 

质粒制备中的内毒素水平*
质粒制备方法 内毒素（EU†/µg DNA） 平均转染效率‡
EndoFree Plasmid Kit 0.1 154%
QIAGEN Plasmid Kit 9.3 100%
2x CsCl 2.6 99%
Silica-gel slurry 1230.0 24%
* 宿主菌：大肠杆菌DH5α  质粒：pRSVcat。
† 1  ng LPS = 1.8 EU。 
‡ 根据表中数据计算 。
无内毒素DNA转染原代细胞的高转染率*
DNA纯化方法 转染细胞比例
EndoFree Plasmid Kit 21.0% ± 0.93
QIAGEN Plasmid Kit 8.1% ± 0.57
Silica-gel slurry 5.2% ± 0.74
* 原代兔胃壁细胞转染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制备。使用Effectene Transfection Reagent进行转染。该数据是细胞表达GFP的百分率，由转染48小时后绿色荧光细胞数量确定。转染效率是每种纯化方法制备的超过2个不同的DNA中6–9个复制样本的平均值。（数据由C. Chew and J. Parente提供，Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.）

Principle

纯化的质粒DNA内毒素污染水平取决于所用的纯化方法（参见”Endotoxin levels in plasmid preparations”）。硅胶技术纯化的DNA具有非常高的内毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和两次CsCl超速离心可获得相对低水平内毒素的纯DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的内毒素去除步骤，获得<0.1 EU/µg的质粒DNA。

QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊设计的过滤装置，用于代替细菌细胞碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可完全去除SDS沉淀，清除细菌裂解液，相比离心可大量节约时间，减少1小时的质粒纯化时间。QIAfilter Mega-Giga Cartridges采用内部真空方式轻松高效的清除大量细菌裂解液（注意：该试剂盒不包含瓶子）。

QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）专为核酸纯化而开发。它卓越的分离性能使得DNA纯度与连续两次CsCl梯度离心获得的DNA纯度相当。由重力流驱动并持续运转的预装QIAGEN-tips，最大限度减少手动制备质粒所需的时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用有毒物质，如苯酚，氯仿，溴化乙锭和CsCl，最大限度地减少对用户和环境的危害。

内毒素，又称脂多糖或LPS，是大肠杆菌等革兰氏阴性菌细胞膜的组成部分，如大肠杆菌（参见”Bacterial cell wall”）。内毒素在质粒裂解纯化过程中释放出来，并显著降低内毒素敏感细胞株的转染效率。此外，内毒素与DNA竞争“自由”转染试剂，影响转染实验中质粒DNA的摄取。内毒素也诱导巨噬细胞和B细胞等免疫细胞发生非特异性免疫反应，从而导致转染结果的误读。这些反应包括诱导的蛋白质和脂类，如IL-1和前列腺素等的合成。总体而言，内毒素在转染实验中是不可控变量，影响结果的可重复性，使它们难以对比、解读。在基因治疗研究中，内毒素可造成内毒素休克综合症和激活补体级联，干扰研究。

Procedure

在碱性条件下，细菌细胞裂解，使用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。将Endotoxin Removal Buffer加入到过滤后的裂解液中。冰浴后，将纯净的裂解物上样到阴离子交换柱上，在适当的低盐和pH条件下，质粒DNA选择性结合。用中盐缓冲液清除RNA、蛋白质、代谢产物和其他低分子量杂质，超纯质粒DNA被高盐缓冲液洗脱（参见”QIAGEN Plasmid Kit procedures”）。最后DNA由异丙醇脱盐、沉淀并且离心回收。

Applications

使用EndoFree Plasmid Kits纯化的DNA适合多种敏感应用，包括：

  • 转染，包括原代、敏感以及悬浮细胞
  • 基因治疗研究
  • 基因沉默
  • 显微注射