Performance

每一批HotStarTaq Plus DNA Polymerase都经过全方位的质量控制测试，包括：严格的PCR特异性和重复性分析，即使低拷贝的靶分子也可扩增。通过检测，HotStarTaq Plus DNA Polymerase优于其它供应者提供的试剂盒，确保高度特异性和在热启动PCR中的卓越表现（参见”Highest specificity”、”Higher specificity with different primer–template systems”和表格）。该试剂盒提供的新型PCR缓冲液使得在多种PCR条件下都维持高特异性，无需优化。Q-Solution可进一步优化PCR，且该试剂盒中提供（参见”Amplification of difficult templates”）。总之，这些组合确保了在多种应用中的特异性扩增（参见”Effect of hot start on RT-PCR performance”和”Highly sensitive single-cell PCR”）。

热启动模式比较

	HotStarTaq Plus DNA Polymerase	HotStarTaq DNA Polymerase	Supplier AII提供的热启动酶	供应商R	供应商I （抗体介导）	手动	石蜡屏障
特异性扩增	++	++	+	++	+	+/–	+/–
PCR优化需求	++	++	+/–	+/–	+/–	–	–
易用性	+++	++	++	+	+	–	–
激活速度	++	+	++	++	++	–	–

HotStarTaq Plus DNA Polymerase特性

浓度：5 units/µl 
重组酶：是 
底物类似物：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、fluorescent-dNTP/ddNTP 
延伸速度：72°C条件下2–4 kb/min
酶半衰期：97°C条件下10 min，94°C条件下60 min 
扩增效率：≥10⁵倍 
5’–>3’外切酶活性：是 
额外添加A：是 
3’–>5′ 外切酶活性：否 
核酸酶污染：否 
蛋白酶污染：否 
RNases污染：否 
自启活性：否  

Principle

HotStarTaq Plus DNA Polymerase具备同HotStarTaq DNA Polymerase一样的卓越表现，激活时间只需5分钟。

 HotStarTaq Plus DNA Polymerase，是一种经修饰的QIAGEN Taq DNA Polymerase，以非活性形式提供，常温下没有聚合酶活性。避免PCR构建和循环初始阶段低温条件下非特异性引物的延伸和引物二聚体的形成（参见”Highest specificity”和”Higher specificity with different primer-template systems”）。95°C条件下孵育5分钟即可激活HotStarTaq Plus DNA Polymerase，这个步骤可整合入已有的热循环程序中。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer通过提高每个PCR扩增退火过程特异性引物的结合比例，确保PCR每个循环特异性扩增（参见”Increased specificity of primer annealing”）。独特的KCl和(NH₄)₂SO₄平衡组合，使得该缓冲液与传统的PCR缓冲液相比在很宽的温度和Mg²⁺浓度范围内都有严格的引物退火条件和高度的特异性，无需进行耗时的优化。

CoralLoad PCR Buffer

HotStarTaq Plus DNA Polymerase同时提供CoralLoad PCR Buffer，CoralLoad PCR Buffer具备QIAGEN PCR Buffer的所有优点，同时可直接将PCR产物上样到琼脂凝胶上，无需加入凝胶上样缓冲液。CoralLoad PCR Buffer具备同样高的PCR特异性，与常规的QIAGEN PCR Buffer一样可减少优化过程。此外，它包含两种指示染料，橙色染料和红色染料，可方便的判断DNA的迁移距离和优化跑胶时间（参见”CoralLoad PCR Buffer”）。该缓冲液提高移液的可见性，并可直接将PCR产物上样至凝胶，提高便利性。

Q-Solution

该产品同时提供Q-Solution，一种新型的PCR添加剂，通过修饰DNA熔解行为促进难扩增模板的扩增。这种独特的试剂可进一步优化由模板引起的表现不理想的PCR，如过多的二级结构和富含GC的模板（参见”Amplification of difficult templates”）。不同于DMSO和其他PCR添加剂，Q-Solution的浓度是确定的，没有毒性，并且保证PCR的纯度。而且PCR中加入Q-Solution不会影响PCR的准确性。

Procedure

HotStarTaq Plus DNA Polymerase提供高效、经优化的实验方案，用于快速、方便的构建PCR反应体系。95°C条件下孵育5分钟激活HotStarTaq DNA Polymerase，可以整合入已有的热循环程序。反应可在室温下建立，更加方便和易于使用（参见”HotStarTaq Plus procedure”）。该试剂盒同时提供CoralLoad PCR Buffer，提高移液的可见性，并可直接将PCR产物上样至凝胶，提高便利性。

Applications

HotStarTaq Plus DNA Polymerase适合多种应用，包括各种富有挑战性的研究，如各种扩增应用：

• 复杂的基因模板
• 复杂的cDNA模板（如RT-PCR）
• 低拷贝的靶分子（如单细胞PCR）
• 多重引物对反应