适用于HTS(高通量筛选)研究试剂盒 货号:12536-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品名称:适用于HTS(高通量筛选)研究试剂盒
  • 产品货号:12536
  • 产品品牌:AAT Bioquest

简单介绍

β-半乳糖苷酶,β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因,而这其中,萤火虫荧光素酶是功能*多的报告基因。*近,其它荧光素酶的使用在逐渐稳固的上升,例如海肾荧光素酶。由于海肾荧光素酶受体分子非常小,因此不需要ATP的辅助。Amplite 海肾荧光素酶报告基团检测试剂盒提供了一个快速灵敏的检测海肾荧光素酶活性的方案。该方案使用了独特的冷光基质形成以实现基于细胞的胞内海肾荧光素酶活性检测。

产品描述

简要概述

Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于荧光素酶报告基因检测的试剂盒,β-半乳糖苷酶,β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因,而这其中,萤火虫荧光素酶是功能*多的报告基因。*近,其它荧光素酶的使用在逐渐稳固的上升,例如海肾荧光素酶。由于海肾荧光素酶受体分子非常小,因此不需要ATP的辅助。Amplite 海肾荧光素酶报告基团检测试剂盒提供了一个快速灵敏的检测海肾荧光素酶活性的方案。该方案使用了独特的荧光基质形成以实现基于细胞的胞内海肾荧光素酶活性检测。独特的荧光基质与海肾荧光素酶反应时,产生强烈的荧光。本试剂盒提供所有必需组分,并且适用于HTS(高通量筛选)研究。本试剂盒灵敏度高,可以便捷地用于96或384微孔板分析。本检测法适合标准的细胞生长培养基,也可用于原始或合成的hRluc基因表达检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*上等的Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒。 

金畔问号:荧光素酶到底该如何检测?

 

适用仪器


发光酶标仪  
推荐孔板: 白色孔板



产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞板
2.根据需要处理细胞
3.从细胞板中去除培养基
4.加入海肾荧光素酶工作溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)
5.在室温下孵育5-10分钟
6.检测荧光强度

 

溶液制备  

1.工作溶液

将1体积100X荧光素酶底物(组分A)添加到100体积的测定缓冲液(组分B)中,制成海肾荧光素酶工作溶液。 注意:海肾荧光素酶工作溶液对光非常敏感,应避免光照。 另外,它不稳定,应放在冰上并在2小时内使用。

点击查看细胞制备指南

 

样品操作及分析

1.用测试化合物处理细胞(或样品),在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物(96孔板)或5 µL 5X测试化合物(384孔板)。
 
2.将细胞板在5%CO2培养箱中于37°C孵育一段时间(通常为4小时至过夜)。

3.每孔海肾荧光素酶工作溶液中加入100 µL(96孔板)或25 µL(384孔板)。

4.在室温下避光将平板孵育5-10分钟。 

5.用酶标仪检测荧光强度。

钙荧光探针Fluo-8, AM用于HTS高通量筛选实验分析 货号:21088-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品名称:钙荧光探针Fluo-8, AM用于HTS高通量筛选实验分析
  • 产品货号:21088
  • 产品品牌:AAT Bioquest

简单介绍

在许多生物学研究中钙离子的测定非常重要。在与钙离子结合的条件下,荧光探针显现出光谱响应,这使研究者可以通过利用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光镜和荧光分光仪等来研究细胞内部游离的Ca2+浓度的变化。在众多的被可见光激发的钙离子指示剂中,Fluo-3 和 Fluo-4是经常使用的。

产品描述

       

钙离子荧光探针Fluo-8,钠盐

钙荧光探针Fluo-8, AM用于HTS高通量筛选实验分析  货号:21088

货号                               21088                       存储条件                        f/l                                       
规格 10*50ug
Ex (nm) 494 Em (nm) 515
分子量 796.53 溶剂 Water
产品详细介绍

        钙离子荧光探针Fluo-8,钠盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂,钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜,流式细胞仪,荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中,Fluo-3和Fluo-4*常用。但是,Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光,并且需要苛刻的细胞加载条件才能*大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可改善细胞负载和钙响应,同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长(在〜490 nm处具有*大激发和在〜520 nm处具有*大发射)。Fluo-8®AM仅需要室温,而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的电池负载。此外,Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍,是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂,具有不同的钙结合亲和力(Fluo-8®:Kd = 389 nM; Fluo-8H:Kd = 232 nM; Fluo-8L:Kd = 1.86 µM; Fluo-8FF :Kd = 10 µM)。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供*上等的钙离子荧光探针Fluo-8,钠盐。

点击查看光谱

钙荧光探针Fluo-8, AM用于HTS高通量筛选实验分析  货号:21088
产品说明书

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南,实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b)在实验当天,将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02%Pluronic®F-127在您选择的缓冲液(如Hanks和Hepes缓冲液)中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系,我们建议钙指示剂的*终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影,建议使用可产生足够信号强度的*小探针浓度。

注意:非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c)如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可以在细胞培养基中加入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d)在HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如2.5mM丙磺舒,如果适用)中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e)在所需的Ex / Em波长下进行实验(见说明书中的表1)。

2.测量细胞内钙响应:

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

基因编辑后高通量SNP筛选酶试剂盒Takara Clontech

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

基因编辑后高通量SNP筛选
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632652 Guide-it SNP Screening Kit 100 Rxns ¥4,863 基因编辑后高通量SNP筛选 基因编辑后高通量SNP筛选 基因编辑后高通量SNP筛选
Clontech 632653 Guide-it SNP Screening Kit 400 Rxns ¥12,277 基因编辑后高通量SNP筛选 基因编辑后高通量SNP筛选 基因编辑后高通量SNP筛选
收藏产品 加入购物车

高通量 – Amresco官网

 
 
          基因敲除    
          基因编辑后高通量SNP筛选 基因编辑后高通量SNP筛选 基因编辑后高通量SNP筛选
基因编辑后高通量SNP筛选 基因编辑后高通量SNP筛选 基因编辑后高通量SNP筛选            
  基因敲入        
          基因编辑后高通量SNP筛选        
 
 
检测基因编辑后细胞群中的单核苷酸替换
Guide-it SNP Screening Kit
· 高通量SNP筛选,无需测序
· 操作流程简单、快速,4小时可完成
· 在任意基因位点检测任意核苷酸替换
· 无论是哪种合子型,都可以识别出基因编辑后的细胞克隆
Guide-it SNP Screening Kit可以检测CRISPR/Cas9系统编辑后的细胞群中的单核苷酸替换,在96孔板中快速识别出基因编辑后的细胞克隆。整个操作流程简单快速,首先通过PCR扩增基因组靶标位点,之后使用识别特定结构的核酸内切酶进行酶切反应,然后读取荧光值就可以完成单核苷酸替换检测。无论需要检测的核苷酸替换类型、细胞克隆的接合性或者靶标位点的基因序列如何,都可以使用这个方法进行检测。了解此试剂盒的原理以及更多产品特点,您可以登录FAQs页面观看视频录像。
 
基因编辑技术其中一个强大的应用,就是在特定的基因组位点导入核苷酸替换,去模拟与人类疾病相关的单核苷酸多态性(SNPs)或者插入终止密码子以实现准确的基因敲除。然而,要从数以百计的克隆中筛选出一个对单核苷酸进行了编辑的细胞克隆,这对我们来说仍然是一个挑战,尤其是在没有相应的表型的情况下。而Guide-it SNP Screening Kit可以充分满足这个需求,让您在数百个细胞克隆中轻松筛选出单核苷酸编辑。
 
应用:
· 快速检测基因编辑后细胞群中的单核苷酸替换
· SNP基因分型
 
Video & FAQs
SNP Screening Kit Video & FAQs
 
 
实验例:
基因编辑后高通量SNP筛选
图1 Guide-it SNP Screening Kit 操作流程示意图。此示范操作流程描述了G>A替换(野生型鸟嘌呤编辑为腺嘌呤)的检测过程。基因编辑后,通过FACS或者有限稀释法分离单细胞并扩大培养成为克隆细胞系,野生型(G,上面)细胞系和核苷酸编辑成功的细胞系(A,下面)。之后提取基因组DNA,PCR扩增靶标位点附近的序列区域,所产生的PCR产物(蓝色)会与两个不同的互补寡核苷酸——一个displacement oligo(绿色)和一个 flap-probe oligo (深/浅紫色)进行杂交,flap-probe oligo 5’端包含一段不互补的固定序列(浅紫色),这段序列形成了flap。Oligos与PCR产物相杂交会形成以上两种结构中的其中一种结构,当然这取决于基因编辑的结果。当基因编辑成功发生时,flap-probe oligo在靶标位点形成完全的碱基配对,这时候产生的结构是一个double-flap结构(下面)。Double-flap结构由Guide-it Flap Detector识别检出,Guide-it Flapase核酸酶特异性剪切并释放出flap,从而产生荧光信号。当没有发生基因编辑时,flap-probe oligo在靶标位点不会形成完全的碱基配对,从而形成一个带有缺口的结构(上面),这个结构不能被Guide-it Flapase核酸酶剪切,也就不会产生荧光信号。通过这种方式,使用Guide-it SNP Screening Kit检测荧光信号就可以确认是否发生了预期的核苷酸替换。
 
基因编辑后高通量SNP筛选
图2 比较纯合子、杂合子和野生型细胞样品的SNP筛选结果。分别以纯合子、杂合子和野生型细胞为样品,使用Guide-it SNP Screening Kit检测所标明的核苷酸替换。在每一组检测结果中,在纯合子和杂合子样品(分别为蓝色和紫色)中所检测到荧光信号值相差不大。
 
基因编辑后高通量SNP筛选
图3 使用Guide-it SNP Screening Kit检测基因分型。本实验例中的SNPs样品均来自于Coriell研究所,这些样品在两个基因组位点(NCP1或者CFT基因)中的其中一个位点上携带了SNPs。使用Guide-it SNP Screening Kit(柱形图)和Sanger测序进行分析。Panel A. NCP1基因型分析。使用分别检测A或者G的两个flap-probe oligos独立进行实验,分析确定哪些样品是A>G替换的纯合子,哪些是杂合子。Panel B. CFTR基因型分析。分析确定哪些样品是没有发生T>A替换的野生型,哪些是T>A替换的纯合子。所有检测结果都通过Sanger测序进行了确认(结果显示在柱形图下面每个样品的下方)。
 
基因编辑后高通量SNP筛选
图4 利用Guide-it SNP Screening Kit在多个人类基因组位点检测核苷酸替换。以野生型或者纯合子来源的基因组DNA(从Coriell研究所获取)为样品,使用Guide-it SNP Screening Kit分析所标明的碱基替换。结果表明所有的碱基替换均可以被成功检测到,与野生型(橙色)和阴性对照(灰色)样品所获得的荧光信号相比,发生了所标明的核苷酸替换的纯合子(蓝色)样品产生了强荧光信号就可以说明这一点。
 
■ 产品组份
· MightyPrep Reagent for DNA
· Guide-it SNP Positive Control Mix
· Guide-it SNP Negative Control Mix
· Terra PCR Direct Polymerase Mix
· 2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP)
· Dilution Buffer
· RNase-free Water
· Annealing Buffer
· Flapase Buffer
· Guide-it Flapase
· Guide-it Flap Detector (40X)
 
 
产品详情请点击:基因编辑后高通量SNP筛选
 
 

页面更新:2020-03-05 11:04:53