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钙离子定量检测荧光探针Fura 2-AM

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钙离子定量检测荧光探针Fura 2-AM 
 
产品编号： F025  CAS号：  
分子式：   分子量：  
EINECS编号：  

Fura 2是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一，Fura 2-AM(钙离子荧光探针)需用无水DMSO(anhydrous DMSO)溶解。

Fura 2对Quin 2的荧光特性做了改进。1 μM Fura 2结合后的信号强度相当于30 μM的Quin 2结合后的信号强度。这样就保证在实验中可以使用比Quin 2的浓度低得多的Fura 2指示剂。Fura 2是一种使用最广泛的比率测量的钙荧光指示剂。目前适用于Fura 2实验的设备有很多，它特别适合于用数字成像显微镜来检测。它比Indo 1更不易受到光褪色作用的影响。细胞形状的改变有时候会影响340 nm和380 nm的荧光比率，比如，平滑肌收缩会同时引起这些波长的荧光信号强度的减小。另外，对于血管来说，340 nm的信号强度的增加会因为血管收缩而趋向于变小，而380 nm信号强度的减小会因为血管收缩而变大。Fura 2-AM是Fura 2的一种乙酰甲酯衍生物，通过培养，能够轻易地负载到细胞中。

Fura 2可以和钙离子(Ca2+)结合，结合钙离子后在330-350 nm激发光下可以产生较强的荧光，而在380 nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340 nm和380 nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度，可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，荧光探针的渗漏，细胞厚度差异等一些误差因素。

Fura 2-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura 2-AM的荧光比较弱，最大激发波长为369 nm，最大发射波长为478 nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura 2-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura 2，从而被滞留在细胞内。Fura 2和钙离子结合后，最大激发波长为335 nm(最大激发波长随离子浓度的的不同而有所不同)，最大发射波长为505nm。实际检测时推荐使用的激发波长为340nm，发射波长为510 nm。如果做双波长检测，则推荐使用的激发波长为340 nm和380 nm。

操作说明 (for NG 108-15/ Neuronal Cell Line)* 
试剂: 
1 mM 的Fura 2-AM/DMSO (将1 mg 的Fura 2-AM 溶于 1 ml DMSO) 
Hanks’balanced salt solution (HBSS) 
HEPES buffer saline (20 mM HEPES, 115 mM NaCl, 5.4 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 0.8 mM MgCl2, 13.8 mM glucose, pH 7.4)

 

操作: 
1. 用含有5%的胎牛血清的DMEM在玻璃底培养皿中培养细胞。
2. 将培养液换成1 mM的 dibutyl cAMP/DMEM，再培养细胞3-4天来诱导树突。
3. 用HEPES buffer saline来稀释1 mM 的Fura 2-AM DMSO溶液，制成1μM的Fura 2-AM   working

solution。
4. 除去培养液，加入0.5 ml 的Fura 2-AM working solution。
5. 培养20分钟，然后除去Fura 2-AM working solution。
6. 用HEPES buffer saline洗涤细胞一次，然后将细胞在HEPES buffer saline中培养1小时。
7. 将此细胞用于荧光钙离子检测。
8. 激发波长380 nm（游离钙）和340 nm（结合钙），发射波长510nm。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。

染色实例1：
钙离子定量检测荧光探针Fura 2-AM

视网膜双极细胞钙离子浓度定标测定

（A）分离的视网膜双极细胞预孵育2 ug/ml 的Fura-2 AM 20分钟，且存在有ionomycin时，分别在无钙、10 mM游离钙离子以及用无钙液洗脱的溶液中的图像；（B）双极细胞不同区域（1～3）的胞内钙离子浓度变化的连续记录图。10 mM游离钙离子溶液可使双极细胞胞体和轴突终末钙离子浓度显著升高，并可部分洗脱。

图像处理软件SimplePCI6，CCD Hamamatsu ORCA-ER，显微镜Olympus倒置显微镜IX70，40倍油镜。
（复旦大学神经生物学研究所  杨雄里院士 提供照片）

 

染色实例2：

 钙离子定量检测荧光探针Fura 2-AM
加载了Fura 2的新鲜分离的大鼠肝脏细胞PE刺激后出现规则胞浆钙振荡，上图为细胞明场图和不同时间点（min）的比例成像（F340/F380）,下图为影响Fura 2荧光强度的比例（F340/F380）随时间的变化。成像系统：Photon Technology International Inc.,显微镜Nikon TE2000U，CCD相机QuantEM512S，软件ERP。
（北京师范大学细胞生物学研究所 崔宗杰教授提供照片）
 

染色实例3：

钙离子定量检测荧光探针Fura 2-AM
左图（Control）为施加高钾（50 mM）前，急性分离的大鼠背根神经节（DRG）细胞胞内钙离子浓度较低，施加50 mM KCl 5s后，DRG细胞内钙离子浓度快速升高（右图）

 

钙离子荧光探针Fura-2, AM [108964-32-5] 货号21060 货号：21023-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品名称：钙离子荧光探针Fura-2, AM [108964-32-5] 货号21060
  • 产品货号：21023
  • 产品品牌：AAT Bioquest

简单介绍

金畔生物优异你看的见： （一）、AAT Bioquest中国**战略合作伙伴金畔生物——生物光谱技术的***，每周都有发货补充，货期短到您意想不到，满足客户的需求就是我们的宗旨，只要您下单，我们就能保证您在短期内收到所需产品。 （二）、新一代荧光染料分子与目标分子严格定量，光信号稳定，能非常准确地反映目标分子的真实情况。

产品描述

钙离子荧光探针Rhod-2, AM

钙离子荧光探针Fura-2, AM [108964-32-5] 货号21060 货号：21023

货号                        21060                             存储条件                       f/l                    
规格 1 mg
Ex (nm) 552 Em (nm) 576
分子量 1123.96 溶剂 DMSO
产品详细介绍

        钙离子荧光探针Rhod-2, AM是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂，钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的**发现中的优选方法。 我们的Fluo-8®和Rhod-4™系列钙检测试剂是*亮的绿色和红色钙指示剂，而我们的Cal-520®和Cal-590™具有*高的细胞内钙检测信号/背景比，因为它们具有出色的保留 活细胞。 AAT Bioquest以*高质量提供其他钙指标，如Fluo-4，Fluo-3，Fura-2，Indo-1，Rhod-5N和Rhod-2 AM，金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供*上等的钙离子荧光探针。

点击查看光谱

点击查看实验方案

产品说明书

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的*终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的*小探针浓度。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验。

2.测量细胞内钙响应：

 

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显著。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

钙离子荧光探针Fura-FF, 五钾盐 货号：21029-AAT Bioquest荧光染料

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  • 产品名称：钙离子荧光探针Fura-FF, 五钾盐
  • 产品货号：21029
  • 产品品牌：AAT Bioquest

简单介绍

钙离子荧光探针Fura-FF, 五钾盐

产品描述

钙离子荧光探针Fura-FF, 五钾盐
钙离子荧光探针Fura-FF, 五钾盐 货号：21029

货号 21029 存储条件                   f/l
规格                       1mg                价格              
Ex (nm) 336 Em (nm) 505
分子量 853.94 溶剂 Water
产品详细介绍


        钙离子荧光探针Fura-FF, 五钾盐是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂，在比例钙指示剂中，*常用的是Fura-2和Indo-1。Fura-2可激发，而Indo-1可发射。对于比率成像显微镜，Fura-2是优选的，在比率成像中，更改激发波长比发射波长更实际。结合Ca2 +时，Fura-2表现出吸收位移，可通过扫描300至400 nm之间的激发光谱来观察，同时监测〜510 nm处的发射。Fura-2钾盐是一种不可渗透细胞的荧光探针，用于按比例模式检测Ca2+。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供上等的钙离子荧光探针Fura-FF, 五钾盐。

点击查看光谱



产品说明书

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的*终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的*小探针浓度。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验。

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显著。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。